Extração do dna e. coli

Engenharia de Bioprocessos

2009

Resumo
Este trabalho experimental reside num conjunto de ensaios laboratoriais os quais tiveram como objectivo a extracção, purificação, concentração e quantificação do DNA

plasmídeo/vector de clonagem (pUC19) de uma estirpe de Escherichia coli. Este último constitui, por assim dizer o objectivo principal de todo o trabalho, já que as todas etapas anteriores foram realizadas com a finalidade de visualisarmos o DNA e de quantificarmos o seu tamanho. Para isso, realizaram-se os seguintes trabalhos/etapas:  TP1: Extrair, purificar, concentrar e quantificar o plasmídeo/vector de clonagem (pUC19) de uma estirpe de E.coli recorrendo à técnica da lise alcalina;  TP2: Extrair, purificar, concentrar e quantificar DNA cromossómico de uma estirpe de E.coli;  TP3: Restrição dos DNAs cromossómico e plasmídico e sua visualização em gel de agarose;  TP4: Visualização do DNA cromossómico e plasmídico por electroforese em gel de agarose (fotografia tirada no Laboratório Fernanda Galo) e quantificação do peso molecular. Para averiguar do grau de pureza das amostras de DNA preparadas nas primeiras etapas do trabalho laboratorial, mediram-se as respectivas absorvâncias para comprimentos de onde de 260 e 280 nm. Para uma amostra não contaminada com RNA, proteínas ou fenol, a razão entre as duas absorvâncias deverá estar compreendida no intervalo 1,9 – 2. Não foi o que se verificou no nosso trabalho. Para o DNA plasmídico a razão foi de 1, indicando grau de contaminação considerável. A concentração determinada para a amostra foi de 0,9 g DNA/L (usando como referência a relação empírica de que 1 Abs. (260 nm) > 50 g DNA/L).

Extracção, purificação, concentração e quantificação de DNA plasmídico e cromossómico de uma estripe de Escherichia coli

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2009

Após a electroforese em gel de agarose foi possível distinguir apenas um fragmento de DNA plasmídico que migrou cerca de 8,25 cm (ver figuras 6 e