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CAPÍTULO II CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS 1. OBJETIVOS E ALCANCE Estabelecer procedimento para a contagem de bolores e leveduras em alimentos. Aplica-se a amostras de matérias-primas, alimentos e rações. 2. FUNDAMENTOS Baseia-se na verificação da capacidade desses microrganismos se desenvolverem em meios de cultura com pH próximo a 3,5 e temperatura de incubação de 25 ± 1ºC. A utilização de meios acidificados a pH 3,5 ± 0,1 promove seletivamente o crescimento de fungos, inibindo a maioria das bactérias presentes no alimento. 3. REAGENTES E MATERIAIS Vidraria e demais insumos básicos obrigatórios em laboratórios de microbiologia de alimentos; Ágar batata glicose 2%; L(+) Ácido tartárico 10%; Solução salina peptonada 0,1%. 4. EQUIPAMENTOS Equipamentos básicos obrigatórios em laboratórios de microbiologia de alimentos. 5. PROCEDIMENTOS 5.1 Preparo das placas Fundir o ágar batata glicose. Resfriar em banho-maria até 46-48ºC. Acidificar o meio até pH 3,5 por meio da adição de 1,5 mL de solução de ácido tartárico 10% para cada 100 mL de meio. Verter nas placas cerca de 15 a 20 mL. Deixar solidificar em superfície plana. Identificar as placas. Antes da utilização, secar as placas semi-abertas com o fundo voltado para cima em estufa a 50ºC por cerca de 15 minutos, ou em fluxo laminar expondo a superfície pelo tempo necessário para a completa secagem. 5.2 Pesagem e preparo da amostra Pesar 25 ± 0,2 g ou pipetar 25 ± 0,2 mL da amostra de acordo com as instruções contidas no Anexo V, “Procedimentos para o preparo, pesagem e descarte de amostras”, deste Manual. Adicionar 225 mL de solução salina peptonada 0,1%. Para amostras de doce de leite e de leite condensado, utilizar como diluente solução salina peptonada com 20% de glicose. A partir da diluição inicial 10-1, efetuar as diluições desejadas, de acordo com o Anexo II, “Diluições e soluções”, deste Manual. 5.3 Procedimentos de controle Aplicar os procedimentos de controle específicos estabelecidos pelo laboratório. 5.4