Clonagem Oct2012

Clonagem de DNA

CLONAGEM DE DNA
• CLONAGEM: é multiplicar assexuadamente.
Na Biologia Molecular, significa mais especificamente crescer uma colônia de bactérias a partir de uma célula única.
Clonagem de genes é essencialmente o processo de amplificar seletivamente um gene particular, incorporando-o numa bactéria e clonando a bactéria.

Primeiros experimentos bem sucedidos de clonagem foram mostrados no início da década de 1970.

Avanços conceituais e tecnológicos que contribuíram para a técnica de clonagem: • Na década de 60: identificação de pequenas moléculas de DNA circular denominadas plasmídeos, que carregam genes de resistência bacteriana a antibióticos. • No final da década de 60: descoberta e caracterização de endonucleases

de restrição (Werner Arber, Hamilton Smith, Daniel Nathans; H. Smith e T.
Kelly)
• 1967: Gellert - purificação da enzima DNA ligase
• 1972: Janet Mertz e Ronald Davis – usaram DNA ligase para juntar fragmentos digeridos com Eco RI.
• 1972: o grupo de Paul Berg conseguiu inserir genes do bacteriofago l e genes de E. coli no genoma do virus SV40, construindo moléculas

recombinantes

Por que clonar?
• Sequenciamento de DNA
• Separar fragmentos de DNA em clones independentes
• Estudar a transcrição e a tradução do gene
• Fazer estudos de expressão funcional

• Sintetizar proteínas para produção de anticorpos
• Sintetizar proteínas para uso terapêutico
• etc, etc

Para clonar é necessário um VETOR
Um vetor de clonagem é uma molécula de DNA que tem 3 características fundamentais: • É capaz de replicar independentemente do cromossomo da célula hospedeira.
• Organismos contendo o vetor devem poder se desenvolver preferencialmente em um dado meio, porque o vetor confere ao organismo alguma propriedade física ou química, ou ambas, que lhe permite este crescimento preferencial.
• O vetor aceita a inserção de DNA adicional em sua molécula de DNA.

Enzimas de restrição

Enzimas de restrição foram primeiramente identificadas pela sua