Caracterização de propriedades catalíticas de uma enzima modelo

ASSUNTO – ENZIMAS

TÍTULO: Caracterização de propriedades catalíticas de uma enzima modelo.

ENZIMA: Aminopeptidase de Canavalia ensiformis.

SUBSTRATO: Neste conjunto de experimentos será explorada uma atividade amidásica da enzima, empregando-se como substrato aminoacil--naftilaminas (atividade denominada arilamidásica) em reações do tipo:

a)

b) A -naftilamina formada pode ser facilmente determinada por uma reação de copulação com o -amino-azotolueno (reagente estabilizado de Garnet) resultando num composto corado com o máximo de absorção em 525 nm. A reação é a seguinte:

Aminopeptidases são enzimas largamente distribuídas na natureza, encontradas tanto em tecidos animais como vegetais e em microorganismos. Estas enzimas são assim chamadas porque catalisam reações de hidrólise da ligação peptídica de aminoácidos N-terminais de peptídeos e em alguns casos de proteínas, removendo seqüencialmente os resíduos de aminoácidos N-terminal de cadeia peptídica. As aminopeptidases, são desta forma importantes no catabolismo de proteínas e peptídeos. Elas participam especialmente, nos processos digestivos e na regulação fisiológica de hormônio-peptídeos, tais como angiotensina, oxitocina, lisilbrasina, vasopressina e hormônios hipolâmicos liberadores de peptídeos hormonais hipofisários, além de outros. A oxitocinase, por exemplo, é uma aminopeptidase que catalisa a hidrólise da ligação peptídica Cys-Tyr na porção N-terminal da oxitocina (potente estimulador da contração uterina) e da vasopresina (hormônio anti-diurético). A oxitocinase possui assim, uma alta especificidade de ação “reconhecendo” apenas a cisteína N-terminal cujo grupamento sulfidrila participa de uma ponte dissulfeto com a outra cisteína da mesma cadeia, como só iria acontecer naqueles dois hormônios-peptídeos. A metionina-aminopeptidase, que participa na síntese de proteínas, tem uma especificidade que