visualização da apoptose

Apoptose

Aptose é um processo de deleção celular, com caracterização morfológica típica, que pode ocorrer fisiologicamente e em algumas condições patológicas. À microscopia óptica e eletrônica o núcleo da célula em apoptose pode ter aspecto inicial em meia-lua, falciforme, navicular ou de corpo arredondado e denso. Já o citoplasma apresenta-se diminuído de volume e igualmente condensado. Na evolução do processo o núcleo pode sofrer ruptura com confinamento dos fragmentos nucleares picnóticos ("budding phenomenon"), ou ainda apresentar-se extremamente compactado e reduzido de tamanho. A apoptose termina com a perda das junções intercelulares sendo então a célula é fagocitada por macrófagos ou englobada pelas células adjacentes. Sob aspecto bioquímico a apoptose decorre da ação de endonucleases, que determinam a fragmentação do DNA. Para a identificação da apoptose através da microscopia óptica, usa-se materiais histológicos preparados com a técnica de rotina e corado com H.E, que segue as seguintes etapas:

1- obtenção da peça
- Biopsia ou necropsia: esfregaço ou punção ( recomenda-se que os cortes não excedam 3mm de espessura)
2-Fixação: esta etapa consiste no uso de agentes físicos ou químicos que imobilizam as substancias constituintes das células, mantendo a arquitetura das mesmas. Os fixadores mais utilizados são o formol e o líquido de Bouin ,ambos fixam as proteínas, evitando sua degradação.
- volume do fixador deve ser de 10 a 20 vezes maior que o do corte histológico a ser fixado.
-O tempo de fixação dependerá do tamanho do fragmento do tecido, podendo levar de 06 a 24h.
-Após a fixação deve ser feita a lavagem do material em agua corrente e armazená-lo numa solução de álcool a 70%
3-INCLUSÃO: Este procedimento consiste na impregnação do tecido com uma substância de consistência firme, que permita, posteriormente, a secção do material em camadas delgadas.
- A parafina é o material mais utilizado nesse procedimento. Como ela não é miscível