Técnicas de coloração(microbiologia)

PREPARO DE AMOSTRAS PARA MICROSCÓPIA ÓPTICA
Coloração – Corar microrganismos com corantes que enfatiza estruturas.

1° Passo (FIXADOS)
1. Os microrganismos são mortos
2. São preservados estruturas (ocorre distorção mínima)
3. Fixar os microrganismos na lâmina

ESFREGAÇO
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Colocar um filme delgado de material ...
Espalhar na superfície
Deixar Secar no ar
A coloração é aplicada
Lavada com água
Seca com papel absorvente

1

2

Corantes
(sais compostos)

Íon Positivo
(Básicos)

Corante
+

•Violeta de genciana
•Azul de metileno
•Vermelho malaquita
•safranina

•Eosina

Íon Negativo
(Ácidos)

•Fucsina ácida
•Nigrosina

Bac pH 7,0
-

As bactérias são levemente carregadas negativamente em pH7,0
3

Corantes ácidos não são atraídos pela maioria das bactérias
Corante
ácidos
-

Bac pH 7,0
-

Assim a coloração cora apenas o fundo (Coloração negativa)
É valiosa na observação da forma geral da célula
(fundo escuro contrastante)

Micrografia óptica, empregando a técnica de coloração negativa, revelando células capsuladas

1. Forma
2. Coloração de cápsula
3. Tamanho
4. Distorção minimizadas

4

TÉCNICAS DE COLORAÇÃO
Para aplicar corantes ácidos ou básicos

3

1. SIMPLES

2. DIFERENCIAL
3. ESPECIAL
1. SIMPLES
É uma única solução aquosa ou alcoólica de um único corante básico

Objetivo básico: Destacar todo o microrg., para que a forma celular e as estruturas básicas se tornem visíveis.
Coloração

Mordente

Esfregaço ------lavagem ------secagem
Corantes simples = Azul de metileno, carbolfucsina, cristal violeta e safranina

5

TÉCNICAS DE COLORAÇÃO
Função do
Mordente

?

1. SIMPLES

1. Aumentar a afinidade de uma
É uma única solução aquosa ou alcoólica de um único coloração a uma amostra biológica corante básico

Objetivo básico: Destacar todo o microrg., para que a forma celular e as estruturas ... (espessa tornem
2. Revestir uma estrutura