trabalho

AULA PRÁTICA – BIOQUÍMICA
QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS POR MÉTODO COLORIMÉTRICO E
TURBIDIMÉTRICO
Prof. Ronaldo Luis Thomasini
Introdução
As proteínas, assim como outras substâncias, podem ser quantificadas através da sua reação, no laboratório, com reativos químicos específicos.
O reativo de Biureto é um reagente composto por sais de cobre em pH alcalino acrescido de um sal estabilizador que reage com as ligações peptídicas das proteínas e peptídeos produzindo uma coloração violácea. A intensidade da coloração é proporcional a concentração de proteínas e/ou peptídeos na amostra. Este método é chamado de colorimétrico, justamente, devido a formação de cor na reação.
As proteínas também podem ser quantificadas utilizando o potencial desnaturante do ácido tricloroacético ou ácido sulfossalicílico que leva uma turbidez formada pela desnaturação das proteínas em meio ácido. Esta turbidez leva a formação de um precipitado com o passar do tempo e precisa ser homogenizado quando mantido sob repouso. Este método é chamado de turbidimétrico e se diferencia das reações colorimétricas devido a formação de turbidez em vez de cor.
Algumas vezes, proteínas específicas podem ser quantificadas por reação imune com anticorpos contra ela (produzidos por imunização de animais ou hibridomas), cujos complexos imunes, são revelados pela adição de PEG 6.000 (Polietilenoglicol PM 6.000) que os torna menos solúveis e formam turbidez. Este último método é melhor chamado de “imunoturbidimétrico”.
Os métodos colorimétricos, como o Biureto, podem ser comparados, visualmente, com uma solução padrão composta por solução de proteínas em concentração conhecida (preparados a partir de proteína purificada em laboratório). No entanto, a comparação visual é muito subjetiva e pouco sensível para ser confiável. Para contornar este problema, foram desenvolvidos equipamentos para converter a intensidade de cor em variáveis numéricas: espectrofotômetro e colorímetro.
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