Tipagem Genética de Microrganismos

MESTRADO EM MICROBIOLOGIA MOLECULAR
Artur Alves, Isabel Henriques, Ana Santos, Marta Tacão & António Correia

Tipagem Genética de Microrganismos

AVEIRO - 2003

A. ALVES, I. HENRIQUES, A. SANTOS, M. TACÃO & A. CORREIA

Tipagem Genética de Microrganismos

© Lab. de Diversidade Microbiana
Centro de Biologia Celular
Dep. de Biologia, U. de Aveiro
3810-193 Aveiro
Tel: [phone] • Fax [phone] http://sweet.ua.pt/~f426 i

Índice
Introdução

1

Protocolos experimentais

9

RFLP's - Ribotipagem

2

Extracção de DNA total bacteriano

9

Digestão de DNA com endonucleases de
Rep - PCR

Sequências nucleotídicas

6

10
12

Marcação por PCR da sonda de DNA 16S

13

Hibridação e Detecção

4

restrição
Transferência por vácuo

Electroforese em campo pulsado

3

14

Preparação de DNA em blocos de agarose 16

Digestão de DNA embebido em agarose

17

Electroforese em campo pulsado

17

BOX-PCR

18

Ligação de produtos de PCR a vector

19

Transformação

19

Extracção de DNA plasmídico

20

Preparação de um gele de agarose

21

Referências

23

i

Introdução
A correcta identificação e classificação de microrganismos é de extrema importância prática, não só no aspecto clínico mas também na fitopatologia, biotecnologia e estudos ambientais. Os métodos usados na discriminação de géneros, espécies e estirpes de microrganismos podem ser divididos em métodos fenotípicos e genotípicos. Os métodos fenotípicos baseiam-se em fenómenos bioquímicos, fisiológicos e biológicos, enquanto os métodos genotípicos detectam polimorfismos ao nível dos ácidos nucleicos, ou variação alélica ao nível de enzimas.
A tipagem de microrganismos, i.e., a capacidade de os identificar ao nível da espécie, e de discriminar entre indivíduos da mesma espécie conheceu grandes avanços nos últimos anos, tendo sido galvanizada por uma série de novos métodos que fazem uso da tremenda variação encontrada