Tecnologia da Biologia Celular e Molecular

Páginas: 5 (1038 palavras) Publicado: 18 de abril de 2014
Tecnologia da Biologia
Celular e Molecular

Os conhecimentos sobre as células progridem
paralelamente ao aperfeiçoamento dos métodos de
investigação. O aparecimento de numerosas técnicas de
uso comum e os diversos ramos da pesquisa biológica
levaram ao surgimento do que se costuma chamar de
biologia celular e molecular, que é o estudo integrado das
células, através de todo o arsenaltécnico disponível.
Neste material serão incluídos apenas algumas técnicas
que têm contribuído para o progresso da biologia celular
e molecular.

O MICROSCÓPIO ÓPTICO OU
MICROSCÓPIO DE LUZ
Limite de resolução e poder de resolução
Limite de resolução: é a menor distância
entre dois pontos que permite distinguí-los
separadamente.
Poder de resolução: é a capacidade de
fornecer imagensnítidas. Quanto menor o LR
melhor poder de resolução.

Fórmula para o cálculo do LR

LR = K./AN
AN = n.sen 

LR = limite de resolução
K = constante experimental
estimada em 0,61
 = comprimento de onda da
radiação
n = índice de refração do meio
 = ângulo formado pelo eixo
óptico da lente objetiva e o
raio de luz mais externo
utilizado na formação da
imagem.

Comprimento de onda daluz varia de 400 – 700 nm.
Comprimento de onda do elétron é de 0,005 nm.

Aspectos comparativos do LR
Dica:
relação entre as unidades apresentadas abaixo:
1 mm = 1000 m (micrômetro); 1 m = 1000 nm
(nanômetro); 1 nm = 10 A (angstrom)

Olho humano
Microscópio de luz

0,2 mm
200 nm (0,2 m)

MEV
MET

10 A (1 nm)
Ao redor de 1 – 2 A (0,1 – 0,2 nm).

TIPOS DE MICROSCOPIAMICROSCOPIA ÓPTICA (MO):
• Campo claro;
• Campo escuro;
• Contraste de fase;
• Contraste interferencial;
• Polarização;
• Fluorescência;
• Microscópio invertido;
• Microscópio estereoscópico;
• Confocal a laser.

MICROSCOPIA ELETRÔNICA (ME):
• de varredura (MEV)
• de transmissão (MET)

MEV
MET

MO

Formação de imagens ao MO
A imagem final será
virtual, maior e
invertida emrelação
ao objeto.

LENTES NO MO

LENTES NO MET

Processamento:
Dimensão/corte
Fixação

MO
Variável
Aldeídos,
Bouin

Pós-fixação
Desidratação
Inclusão
Microtomia
Coloração ou
Contrastação

Álcool,
acetona.
Parafina ou
Historesina
Micrótomo
Coloração

MET
1mm
Aldeídos

MEV
Variável
Aldeídos

OsO4
Álcool,
acetona.
Epon, Spur
ou Araldite

OsO4
Álcool,acetona.
Secagem

Ultramicrotomo
Pb, Uranila e
etc

Evaporação
com ouro

Etapas da
preparação
das amostras
para MO.

Etapas da
preparação
das amostras
para a MET

MICROTOMIA
- Navalhas
Aço
Vidro (1950)
Diamante e safira (1959)
PREPARO DAS NAVALHAS DE VIDRO

NAVALHA DE DIAMANTE

3000 US$

Técnica de contrastação (Dupla contrastação)
Solução a 2%
de 3 a 10min.
e lavar 3
vezes em água
destilada.
Acetado de uranila

Solução a 3% com
mesmo processo
anterior.
Citrato de chumbo

Somente Pb

Uranila + Pb

Fígado de camundongo

Imagens ao MET

Célula de camundongo em
apoptose mediada por LTC
Pâncreas de rato (glutaraldeído
(2,5%), cacodilato (0,1M),
acetato de uranila/citrato de
chumbo.
Raiz (glutaraldeído seguido por
tetróxidode ósmio).

Imagens ao MEV
MEV - UNICAMP

CITOQUÍMICA
Citoquímica: compreende técnicas diversas para a identificação e
localização das moléculas que constituem as células
Ácido desoxirribonucléico (DNA): O DNA é demonstrado
citoquimicamente pela reação de Feulgen. Etapas:

• Mergulha-se as lâminas em solução aquecida de ácido clorídrico, o
que promove hidrólise das basespúricas, deixando livre as
extremidades da desoxirribose, que possuem radicais aldeídos;
• Trata-se o preparado pelo reativo de Schiff (solução de fucsina
básica descorada pelo anidrido sulfuroso), que, ao se combinar com
os grupamentos aldeídicos da desoxirribose, forma um complexo de
cor vermelha.

Polissacarídeos: um exemplo é a técnica para evidenciar o glicogênio
conhecida como técnica...
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