TÉCNICAS DE COLORAÇÃO DE GRAM

Páginas: 5 (1228 palavras) Publicado: 11 de maio de 2014
INTRODUÇÃO
O método de Gram é uma das mais importantes técnicas de coloração na microbiologia medica. Porem, os resultados da coloração de Gram não é universalmente aplicável, pois algumas células bacterianas coram-se fracamente ou não adquirem cor. A reação de Gram e mais consistente quando utilizada em bactérias jovens, em crescimento.
A reação de Gram de uma bactéria pode fornecerinformações valiosas para o tratamento de doenças. As bactérias gram-positivas tendem a ser mortas mais facilmente por penicilinas e cefalosporinas. As bactérias gram-negativas geralmente são mais resistentes porque os antibióticos não podem penetrar a camada de lipopolissacarideo. Parte da resistência a estes antibióticos entre ambas as bactérias gram-positivas e gram- negativas é devido à inativaçãobacteriana dos antibióticos.
O mecanismo da coloração de Gram tem como base as diferenças nas estruturas da parede celular das bactérias gram-positivas e gram-negativas e como cada uma dessas estruturas reage aos vários reagentes (substancias utilizadas para produzir uma reação química). Cristal violeta, o corante primário, cora as células gram-positivas e gram-negativas de purpura, pois penetra nocitoplasma de ambos os tipos celulares.
Quando o lugol, solução iodo-iodetada (o mordente), e aplicado, forma cristais com o corante que são muito grandes para escapar pela parede celular. A aplicação de álcool desidrata a peptideoglicana das células gram-positivas para torna-la mais impermeável ao cristal violeta-iodo. O efeito nas células gram-negativas e bem diferente; o álcool dissolve a membranaexterna das células gram-negativas, deixando também pequenos buracos na fina camada de peptideoglicana, pelos quais o cristal violeta-iodo se difunde. Como as bactérias gram-negativas ficam incolores apos a lavagem com álcool, a adição de safranina (contracorante) torna as células cor-de-rosa. A safranina fornece à cor contrastante a coloração primaria (cristal violeta). Embora as célulasgram-positivas e gram-negativas absorvam a safranina, a coloração rosa da safranina é mascarada pelo corante roxo-escuro previamente absorvido pelas células gram-positivas.

OBJETIVO
Realizar a técnica da Coloração de Gram em bactérias cultivadas em meio sólido, através do esfregaço de laminas, utilizando o método de microscopia para estabelecer a distinção entre:bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, diferenciando as bactérias de acordo com a morfologia (formas e arranjos).

MATERIAIS
- Lamina para microscopia
- Alca de platina
- Pinça
- Tubo contendo solução salina esterilizada
-Cultura de bactérias gram-positivas e gram-negativas
-Cristal violeta
-Lugol
-Álcool
-Fucsina
-Agua destilada
-Bico de Busen
-Suporte para lamina
-Papel higiênico
-Assadeira
-Microscópio
-Óleo deimersão

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
1) Técnica de coloração Gram:
a) Preparação do esfregaço:
- Flambamos rapidamente uma lâmina de microscopia limpa, em ambos os lados, passando lentamente sobre a chama do bico de Busen;
- Identificamos o lado da lâmina para a realização do esfregaço. A lâmina limpa foi colocada sobre um papel absorvente;
- Flambamos três vezes repetidamente a alça deplatina ao rubro e deixamos esfriar, colocando-a próxima á chama;
-Sobre a lâmina que foi colocada em cima do papel absorvente, aplicamos uma gota de salina estéril ,limpando o excesso da salina, e com a alça de platina coletamos uma pequena quantidade de cultura contida na placa de Petri ,realizando esse processo próximo a chama;
- Realizamos movimentos de rotação constantes(emulsionar) feito com aalça de platina contendo pequena quantidade de cultura nesta gota de salina, para obtermos um esfregaço de forma oval, bem definido e uniforme;
- Após termos feito o esfregaço, deixamos a lâmina secar naturalmente próxima á chama.
b) Fixação do esfregaço:
-Pegamos com o auxilio de uma pinça a lâmina em uma das suas extremidades e passamos lentamente sobre a chama por três vezes...
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