Técnica câmara de neubauer

Páginas: 8 (1771 palavras) Publicado: 13 de outubro de 2011
Câmara de Neubauer – Contagem de células microbianas – Determinação da Concentração de células

1. Introdução a Câmara de Neubauer

2.1. Quando se trabalha com microorganismos, na maioria das vezes deseja se determinar a concentração de células da suspensão preparada.

2.2. Uma das formas mais comuns de se obter esta estimativa é através da contagem ao microscópio,utilizando-se uma Câmara de Neubauer, também conhecida como Hemacitômetro ou Câmara de Contagem.

2.3. A Câmara de Neubauer é uma lâmina grossa de uso microscópico, com formato retangular e normalmente de vidro, com uma depressão no centro, utilizada para fazer contagem de células por unidade de volume de uma suspensão.

2.4. Na UP há dois modelos de Câmara de Neubauer, uma com a superfícieda câmara espelhada e a outra não espelhada veja fotos abaixo.

| |
Neubauer com Câmara espelhada | Neubauer com Câmara não espelhada |

2.5. A Câmara de Neubauer é constituída de duas câmaras, ao centro, uma embaixo da outra, sobre as quais é colocada a lamínula para a leitura no microscópio.
Câmara Superior
Câmara Superior
Câmara Inferior
Câmara Inferior


2.6. Nocentro destas câmaras há várias linhas perpendiculares com marcações em quadrantes. Observando-se ao microscópio, percebe-se que existem três tipos de quadrantes denominados A, B e C, de medidas conhecidas, que juntos formam um quadrado maior.

2.7. Estes quadrantes são usados para fazer as contagens e assim determinar a concentração de células em um determinado volume de fluido, para podercalcular a concentração de células no líquido global (do qual foi tirado à amostra analisada).

2.8. Pode-se notar que estes quadrantes têm sub-divisões diferentes, fazendo com que o critério para escolha do quadrante onde serão contadas as células, seja o tamanho destas a serem quantificados. Assim, usualmente, células muito pequenas são contados no quadrante C, as de tamanhointermediário no quadrante B, enquanto células grandes são contadas no quadrante A (que é o caso das leveduras).

2.9. A área total compreendida pelos 9 quadrantes é de 9 mm2 sendo que cada quadrante (A, B e C) são quadrados de 1 x 1 mm. Ao ser colocada a lamínula (especial para ser usada na câmara de Neubauer, estas são mais grossas que as comuns) a distância da lamínula até a lâmina (profundidade)mede 0,1 mm, o que permite se obter um volume de 0,1 mm3 em cada quadrante.

2.10. A precisão da contagem manual utilizando este método depende basicamente:

* da mistura correta da amostra, para que a concentração esteja homogênea e que não se formem bolhas;
* do número de câmaras (quadrantes) contadas;
* do número de células contadas, onde a concentração viável é de 200 a 500por 0,1 mm3.

2. Contagem de células e determinação da concentração celular com a Câmara de Neubauer

3.11. Material

* Câmara de Neubauer e lamínula
* Microscópio Ótico
* Agitador vortex
* Tubos de eppendorf
* Estante para tubos de eppendorf
* Micropipetas de 100 a 1000 µL (duas), uma para coletar amostra e outra para água
* Micropipeta de 100 µL* paracarregar a câmara de Neubauer
* Ponteiras para os dois tipos de pipetas
* Piscete com água destilada para as diluições e para limpar a câmara de Neubauer
* Piscete com álcool 70 % para limpar a câmara de Neubauer
* Papel macio para limpar/enxugar a câmara de Neubauer e a lamínula
* Becker de 250 mL para conter água destilada a ser usada nas diluições
* Becker de 500 mL paracolocar os eppendorf e ponteiras de pipeta usadas
* Becker de 500 mL para conter o álcool e água utilizados na limpeza da câmara e lamínula de Neubauer

*Obs.: A pipeta de 100 µL é uma pipeta alaranjada que facilita muito o carregamento da Câmara de Neubauer. Com as outras pipetas fica mais difícil carregar a câmara. Também se pode utilizar as pipetas de 50 µL que tem o corpo cinza e a...
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