SEQUENCIAMENTO DO DNA

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SEQUENCIAMENTO DO DNA
Temos duas técnicas mais importantes para o sequenciamento de DNA, são o método químico de degradação de bases e o método de terminação da cadeia ou método de Sanger. Os dois métodos são baseados na produção de um conjunto de fitas simples de DNA que são separadas pelo princípio de eletroforese. O método de terminação da cadeia gera dados que são mais facilmente interpretados. O sequenciamento por terminação da cadeia é baseado na incorporação de desoxinucleotídeos e de didesoxinucleotídeos a uma cadeia de DNA em crescimento, tendo como molde o DNA de interesse. Quando os didesoxinucleotídeos são adicionados, a extensão da cadeia é interrompida, pois esses didesoxinucleotídeos não apresentam um grupo hidroxila necessários para a ligação do próximo desoxinucleotídeo. Como esses didesoxinucleotídeos são marcados, podem ser detectados e a seqüência dos nucleotídeos identificada. Frederick Sanger é o responsável pelo desenvolvimento do sequenciamento do DNA, conhecido como método de Sanger. É o método mais usado devido à sua simplicidade. A TECNICA DO DNA RECOMBINANTE É um conjunto de técnicas, de ampla aplicação. Pode ser usada para estudar mecanismos de replicação e expressão gênica, na determinação da sequência de um gene (e por tabela a proteína que ele codifica), ou no desenvolvimento de 'novas' culturas microbianas, capazes de resistir a certos antibióticos ou transmitir determinadas características.
A técnica de DNA recombinante é relativamente fácil de compreender. Por meio do uso de proteínas chamadas enzimas de restrição, são isolados genes individuais a partir de DNA humano, e inseridos em pequenos pedaços de DNA cortados com a mesma enzima, chamados plasmídeos. Uma vez inserido dentro do plasmídeo, o gene pode ser fixado utilizando outra enzima chamada DNA ligase. A origem do termo Clonagem Molecular vem da Genética Bacteriana que considera uma colônia de bactérias como um clone, pois todos os indivíduos são

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