Relatórios pcr
Biologia Molecular
Profa: Ana Paula M. Leboute
Aluna: Rosângela Gusmão Pereira
RELATÓRIO
Extração de DNA de células do epitélio bucal, que foram coletados em swabs e colocados em tubinhos com 1 ml de solução fisiológica. Logo centrifugados à 12000 rpm por 5 minutos, separando desta maneira o pallet (células que ficaram ao fundo do tubo) do sobrenadante e descartando-o. Após foi adicionado 200ul de solução de Lise+Proteinase K, que estas rompem as estruturas das membranas celulares para liberação do material genético. Assim logo colocados em banho-maria, 60 ºC por 1 hora. Depois foi adicionado ao tubo de Na Cl (130ul), que auxilia no desmembramento dos cromossomos, e logo são centrifugados á 12000 rpm por 5 minutos. Agora é retirado 500 ul do sobrenadante e passado para outro tubo e, descartado e restante. Neste outro tubo com os 500 ul do sobrenadante é adicionado 600 ul de etanol, para fazer a separação do DNA dos demais componentes celulares, e misturados por inversão e precipitados O/N em freezer. Novamente são centrifugados, desta vez em 12000 rpm por 30 minutos. Descartado o sobrenadante, o restante é lavado com 1 ml de etanol 70% e centrifugado por 5 minutos. Secados em temperatura ambiente e ressuspendido em 1 ul de água Mili-Q ou TE.
FUNÇÃO DOS REAGENTES
Sal: O sal contribui no desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos, DNA e proteínas.
Detergente: O detergente age nas membranas celulares, desagregando os fosfolipídios que as constitui com a ruptura da membrana o conteúdo celular, incluindo as proteínas e DNA, dispersam-se na solução.
Álcool: O DNA não se dissolve no álcool, assim o DNA precipita na solução, pois é menos denso que a água e a mistura aquosa dos restos celulares.
SEMELHANÇAS E DIFERENÇAS ENTRE OS DOIS EXPERIMENTOS
Os reagentes utilizados nas duas extrações, sal, detergente e álcool, possuem as mesmas funções, porém são preparados de maneiras e concentrações diferentes. A extração