Relatório extração de dna

FACULDADES METROPOLITANAS UNIDAS

NÚCLEO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE

CURSO DE BIOMEDICINA

PRISCILLA LIMA NÓBREGA
CRISTIANE ALVES
ELIZABETH LUCENA
ERIC D. MARIANO
PATRICIA DA SILVA GOLÇANVES
VERÔNICA LOPES

Análises dos processos referentes à extração de DNA com comparação dos protocolos com clorofórmio e sem clorofórmio

São Paulo, 2012
INTRODUÇÃO

Neste relatório analisamos os processos referentes à extração de DNA com comparação dos protocolos com clorofórmio e sem clorofórmio. O primeiro procedimento será a extração do DNA, onde adicionamos ao pellet Buffer A (TRIS 0,01M ph 8,0 / EDTA 0,002 M/ Nacl 0,04 M), cada componente da solução tem uma função especifica. O Tris funciona como solução tampão, estabilizando o PH, O EDTA por sua vez, inibi íons que ativam as DNAses, que degradam o DNA e o NaCl ajuda na precipitação das proteínas e do DNA, processo conhecido como ‘salting in’.
“Em baixas concentrações de sais (baixa força iônica), a solubilidade em geral aumenta, pois os íons salinos tendem a se associar às proteínas contribuindo para uma hidratação e/ou repulsão entre as moléculas, aumentando a solubilidade”. ¹
1.http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_pos2004/constituintes_microorg/proteinas.htm
Adicionamos SDS, um detergente anfipático cuja função é desnaturá-las, ou seja, convertê-las numa estrutura linear, a forma nativa é geralmente globular e conferir-lhes densidade de carga uniforme. Em seguida proteinase K, cuja função será degradar todas as proteínas. Depois de um processo de homogeneização e incubação será adicionado NaCl 5M, onde está concentrado e cuja função será ajudar na precipitação das proteínas e do DNA, processo conhecido por salting out. “Em elevadas concentrações salinas, os íons competem com a proteína pela água, ocasionando perda de água de hidratação, atração mútua entre as moléculas e formação de precipitado”. ¹