Relatório de Bioquímica

Páginas: 3 (602 palavras) Publicado: 27 de maio de 2014
Introdução:
Existem vários métodos de quantificação de proteínas. A escolha do método
adequado depende de vários fatores como natureza da proteína, presença de
interferentes, rapidez,sensibilidade e eficiência do método. Métodos como Biureto,
Bradford, ácido biccinconínico e Kjeldahl são bastante utilizados nos laboratórios que
empregam a análise de proteínas para diversos fins. Nestaaula prática vamos utilizar o
método de Bradford para quantificar proteínas em extrato de batata contendo
mitocôndrias isoladas. Desta forma, a quantidade de mitocôndrias será determinadaobservando-se a quantidade de proteína total no extrato.
No Método de Bradford, um composto conhecido como comassie brilliant blue G-
250 liga-se a proteínas em meio ácido. Estudos sugerem que a formaaniônica deste
composto forma complexos com as proteínas (esquema 1). Neste caso, ocorrem atrações
eletrostáticas, interações hidrofóbicas e forças de Van der Waals. Tal complexo possui
uma coloraçãoazul. A intensidade desta coloração dependerá da concentração de
proteínas da amostra e será mais intensa se a concentração for alta. Este complexo
formado absorve em 595nm e pode ser lido em umespectrofotômetro.
Procedimento:
Primeiro passo: preparar a curva padrão com a albumina bovina. Os pontos a serem
preparados são os seguintes: 0,062mg/ml, 0,125mg/mL, 0,250mg/mL, 0,5mg/mL, 1mg/mLe 2mg/mL. A curva será preparada partindo-se de uma solução de 2mg/ml fornecida
comercialmente.
Raciocinar: por que se deve preparar uma curva padrão para se realizar uma análise
química?Segundo passo: diluir a amostra em água nas seguintes proporções: 1/10, 1/20,1/40 e
1/60 (amostra/água). 1/10= 20µL de extrato + 180µL, 1/20= ? e 1/40= ?.
Raciocinar: por que diluir as amostras?Terceiro passo: Aplicar 6µL dos pontos da curva padrão e das amostras em uma placa
de Elisa. Logo após, adicionar 180µL do reagente commasie blue.
Raciocinar: Que aconteceu quando você adicionou...
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