reação em cadeia polimerase
556 palavras
3 páginas
Reação em Cadeia da Polimerase(PCR)
PCR - consiste em fazer cópias de DNA “in vitro”, usando os elementos básicos do processo de replicação natural do DNA.
PCR Amplifica uma Seqüência Alvo
Seqüência Alvo
Replicação
“in vitro” do
DNA
DNA
DNA Supercoiled
Alternância de temperaturas a cada ciclo:
DESNATURAÇÃO
ANELAMENTO
Cromossomo
POLIMERIZAÇÃO
Alternância de temperaturas a cada ciclo
D. Desnaturação:
94 C - 96 °C
A. Anelamento:
37 C - 65 °C
E. Extensão: 72 °C
Evolução da PCR
Primeira publicação - Science
Cetus Corporation
1985 R. Saiki, S. Scharf, F. Faloona, K.
Mullis, G. Horn, H. Erlichand N.
Arnheim
Amplificação enzimática da β-globina para o diagnóstico da anemia falciforme
Evolução da PCR automação na PCR
Molécula do ano - Science.
Hoffmann-La Roche Inc. & Cetus
Desenvolvimento da PCR em diagnóstico Lago do
“Yellowstone National Park”
Primeiro ciclo da PCR
Anelamento dos primers
Denaturação pelo calor
95° C - 30 a 50 s
55 - 64° C
Extensão
Após sucessivos ciclos…
1 cycle = 2 Amplicon
No. de
Ciclos
No. Amplicon
Cópias por Alvo
1
2
2
4
3
8
4
16
5
32
6
64
20
1,048,576
30
1,073,741,824
2 cycle = 4 Amplicon
3 cycle = 8 Amplicon
4 cycle = 16 Amplicon
5 cycle = 32 Amplicon
6 cycle = 64 Amplicon
7 cycle = 128 Amplicon
Polimerização é feita por uma DNA polimerase termoestável = síntese exponencial de moléculas de DNA.
São utilizados dois “primers”- que delimitam o segmento amplificado
Cada uma das novas fitas de DNAextendidas a partir dos “primers” serve como template para síntese de uma nova fita. Isso garante o aumento exponencial do número de novas fitas.
Todas as fitas de DNAsintetizadas durante a PCR têm a sequência dos primers na extremidade 5’e a seqüência complementar aos primers na posição 3’
“primers”
5’
3’
3’
5’ complemento dos “primers”
3’
POLIMERIZAÇÃO: 5’