Quantificação

A quantificação precisa de proteínas é essencial para todo tipo de experimento que trabalha com elas, em várias áreas como biologia molecular e celular, bioquímica, biologia do desenvolvimento e neurociências. Desde o século passado métodos de quantificação diferentes foram desenvolvidos, devido a sua ampla utilização.
A quantificação total de proteínas engloba métodos tradicionais como absorbância de UV em 280 nm, ensaio de ácido bicinconínico (BCA), Bradford e método de Lowry. Os reagentes são vendidos normalmente como kits, mais práticos, desenvolvidos pelos fornecedores comerciais. As quantificações envolvendo apenas uma proteína específica incluem o teste ELISA, western blot, espectrometria de massa, dentre outros.
Aqui iremos discutir alguns dos métodos mais utilizados para determinar a concentração proteica, ressaltando suas vantagens e limitações. É importante frisar que, além desses ensaios não serem compatíveis com todas as proteínas, nenhum deles é específico somente para proteína, com componentes não proteicos podendo interferir no resultado.
As agências regulatórias do governo ou grupos comerciais podem exigir métodos específicos para a determinação total de proteínas. Por exemplo, a Associação Internacional da Indústria Sérica ( www.serumindustry.org), grupo comercial para fornecedores de soro, exige que concentração proteica em produtos séricos seja determinada pela Reação de Biureto. No Brasil, a ANVISA determina que para o registro de produtos biológicos, a concentração proteica seja determinada pelo Método de Kjeldahl, Biureto ou Bradford.
Ensaios de quantificação de proteínas
A tabela 1 resume os principais ensaios de quantificação de proteína. Na escolha do ensaio, é importante que se avalie alguns parâmetros para saber o mais adequado, como a compatibilidade do ensaio com o tipo de amostra, a faixa de detecção, o volume da amostra, ter um espectrofotômetro apropriado, o tempo e custo do ensaio, etc.
Ensaio Abs. Mecanismo Limite Vantagens