Purificaçao

Purificação das proteínas
Existem diversas proteínas diferentes em uma única célula. A purificação das proteínas, é a primeira etapa essencial para experimentos posteriores.
Antes das etapas da purificação, a proteína deve ser liberada das células e de organelas subcelulares. A primeira etapa é homogeneização que envolve o rompimento das células. Existe uma variedade de técnicas, a mais simples é moer o tecido em um liquidificador com um tampão adequado. As células são rompidas, liberando as proteínas solúveis. Outra técnica é o uso de um homogeneizador de Potter-Evejhem, um tubo de ensaio de parede espessa pelo qual passa um êmbolo bem ajustado, ou ainda a técnica chamada sonicaçao, que envolve o uso de ondas sonoras.
Após a homogeneização, as células são submetidas à centrifugação diferencial, utilizada para separar componentes celulares. Girar a amostra em 600 vezes a força da gravidade resultará em um pellet de células e núcleos não rompidos.
Depois que as células são homogeneizadas, elas são submetidas a centrifugação diferencial, que consiste na centrifugação da amostra em diferentes velocidades, que será usada para separar os componentes celulares.
Logo após as proteínas serem solubilizadas, são submetidas a uma purificação bruta com base na sua solubilidade. Onde o sulfato de amônio é o reagente mais comum a ser utilizado devido a sua alta solubilidade que permite obter soluções muito concentradas, este procedimento chama-se salting out (adição de sal), com adição de sal a proteína perde água e fica desidratada.
Essas técnicas preliminares não darão uma amostra muito pura, mas tem uma importante tarefa de preparar o homogenato para os procedimentos mais eficientes como a cromatografia e a eletroforese.

Métodos de purificação das proteínas
Cromatografia em coluna
È um dos métodos mais comuns de purificação de proteínas (figura 1). Esta técnica consiste na passagem de proteínas através de uma coluna e possuem duas fases diferentes, a fase móvel e