Preparo e esterilização de meios de cultura

INTRODUÇÃO A utilização de calor em ambiente úmido é um dos métodos mais eficazes de destruição de microrganismos. A morte das células microbianas por ação do calor úmido resulta da desnaturação das proteínas e da destabilização da membrana citoplasmática. Ocorre quando as células são sujeitas a temperaturas superiores à Temperatura Máxima de crescimento dos microrganismos em causa. A esterilização por calor úmido é efetuada em autoclave, que consiste numa câmara com vapor de água saturado à pressão de 1 atm acima da pressão atmosférica, a que corresponde, em locais ao nível do mar, uma temperatura de ebulição da água de 121ºC. No laboratório de Microbiologia, é usual sujeitar o material a esterilizar a 121ºC (1 atm; pressão relativa) durante 15 minutos, de modo a assegurar a morte de todas as formas de vida bacterianas, incluindo a dos endósporos bacterianos, mais resistentes ao calor que as células vegetativas. Contudo, o tempo necessário para se esterilizar convenientemente os materiais, a esta temperatura, depende da natureza do material a esterilizar e/ou do seu volume. O calor úmido sob pressão é utilizado na esterilização de meios de cultura que não contenham componentes termolábeis e na esterilização de material de plástico e de vidro a utilizar nos trabalhos experimentais de Microbiologia. Os meios de cultura devem ter na sua composição, os nutrientes indispensáveis ao crescimento do organismo em questão, sob forma assimilável e em concentração não inibitória do crescimento. Além disso, após a sua preparação, cada meio de cultura deve ser submetido a esterilização, por forma a eliminar qualquer organismo vivo contaminante.
Nesta aula prática, prepararemos meios de cultura que serão esterilizados em autoclave, além de fazer tampões e esterilização de vidrarias em estufa.
OBJETIVOS
Preparar meios de cultura: caldo nutriente e ágar nutriente;
Executar esterilização dos meios em autoclave (calor úmido);
Executar esterilização das