POP (procedimento operacional padrão) Hemoglobina glicada

Páginas: 2 (465 palavras) Publicado: 17 de setembro de 2014
13- Procedimento técnico:-
Preparo do hemolisado
Em um tubo 12 x 75 adicionar 0,4 mL de hemolisante (nº 2) e 0,1 mL da amostra. Agitar fortemente por 20 segundos e esperar 5 minutos. Se ahemólise for incompleta (o líquido no tubo se mostra turvo), centrifugar e usar o sobrenadante. Antes de iniciar a cromatografia, assegurar-se de que o hemolisado, o tampão e as colunas tenham a mesmatemperatura ambiente. Nunca realizar a cromatografia se o hemolisado, tampão e coluna tiverem temperaturas diferentes do ambiente no qual se realizará a cromatografia.

Preparo da coluna
A presença debolhas de ar no filtro ou na resina interfere na drenagem do tampão, aumentando o tempo de eluição da hemoglobina glicada.
Retirar a tampa superior da coluna, introduzir o bastão fazendo movimentosgiratórios descendentes a ascendentes para ressuspender a resina. Remover imediatamente a tampa inferior, colocar a coluna em um tubo de ensaio e esperar que todo o líquido penetre na resina. A partirdaí, a coluna estará pronta para uso e a cromatografia deverá ser iniciada imediatamente. Jamais iniciar a cromatografia em temperatura inferior a 16 ºC ou superior a 30 ºC.
Medir a temperatura dolíquido que drenou da coluna para correção do resultado.
Cromatografia
Adicionar 0,05 mL do hemolisado sobre a resina, de modo que não haja ressuspensão da mesma, evitando a formação de bolhas dear. Esperar que o hemolisado penetre na resina.
Transferir a coluna para um tubo de ensaio limpo e seco, marcado com o número 1 e adicionar lentamente, com a ponta da pipeta tocando a parede dacoluna, 3,5 mL de Tampão Hb-Rápida (nº 1). A eluição da Hb-G se completa quando todo o tampão penetra na resina.
Colorimetria
Homogeneizar o conteúdo do tubo número 1 (Hb-G) e usá-lo para a colorimetriasem qualquer tratamento adicional.











Para um tubo limpo e seco,marcado com o número 2 (Hb-total)pipetar 7,0
mL de água destilada,adicionar 0,02 mL do hemolisado e misturar....
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