Performance HPLC, coluna e Quattro LC

Performance HPLC, coluna e Quattro LC
Teste de coluna
Testar a eficiência da coluna com metilparabeno 0.5mg/mL ou tolueno (1:40 em metanol) com fase móvel composta por Metanol / Água 70:30 com fluxo de 1.5mL/min com o comprimento de onda de 254nm. Medir o número de pratos teóricos ver assimetria do pico.

Regeneração de coluna
Várias fases móveis e amostras contêm componentes que podem ser adsorvidos pela coluna e finalmente promover uma alteração nas características de separação da coluna. Uma alteração de tempo de retenção, de pressão de trabalho ou de formato de pico poderão indicar uma contaminação. “Em alguns casos“ apenas a passagem da fase móvel ou um solvente orgânico poderá trazer a sua coluna a antiga forma, já em outros casos estas colunas poderão ser submetidas a procedimentos para regenerar sua separação até a condição de uma coluna nova através da passagem de solventes de várias polaridades em uma seqüência lógica. Convém estar sempre atento para o caso do problema não ser exatamente da coluna e sim do equipamento. Sugere-se uma lavagem de regeneração com cerca de 10 volumes da coluna para cada um dos solventes abaixo descritos, lembrando o fato de nunca deixar em contato dois solventes imiscíveis:

Fase reversa (C18, C8, Fenil, CN):

Metanol / Água 5:95 > Metanol > MeCN > THF > MeCl > Metanol

Fase reversa com grande diâmetro de poro (300 Aº) (C18, C8, Fenil, CN):

Água > TFA 0,1% > Isopropanol > MeCN > Metanol > Água

Fase Normal (Si, NH2 , CN):

Hexano e clorofórmio > MeCl ou tricloroetileno > isopropanol >

Troca iônica (SAX, SCX, NH2):

Metanol / Água 5:95 > Metanol > MeCN > MeCl ou tricloroetileno > Metanol

Remoção de proteína (C18, C8, C4, Fenil):
Metanol / Água 5:95 > TFA 0,1% > Isopropanol > MeCN > Metanol

Quando a coluna for ser utilizada com meios tamponados, passar a fase móvel com água antes para evitar possibilidade de precipitação do sal.

Bomba
Retirar a conexão do mix referente a bomba a ser testada,