Obtenção e extração do dna

Obtenção do DNA

Existem várias técnicas para extração do DNA, que utilizam diferentes metodologias e espécimes biológicos. O sangue é o padrão-ouro de material utilizado para extração de DNA porque é fonte abundante de informação genética e por fornecer amostra fresca para análise. No entanto, muitos outros materiais podem ser efetivamente analisados: células epiteliais da mucosa oral; unhas, pêlos e fios de cabelo (região do bulbo capilar); manchas de material biológico (líquido seminal, urina, saliva) em vidro, faca, têxtil; ossos carbonizados, ossadas ou dentes; material anatomopatológico; e inclusive células deixadas por impressão digital em selos, filtros de cigarro, copos, talheres e telefone.

Extração do DNA

Extração do DNA por saling out feita usando sangue como amostra: Cerca de 500µL da amostra de sangue coagulado e tratado para a dissolução do coágulo foram transferidos para microtubos de 1,5mL e a eles foram acrescentados 1,0mL de solução de RBCL (red blood cell lysis), composta por sacarose, triton X, MgCl2 6H2O 1M, Tris pH 7,5 1M e água ultrapura, para a eliminação total de hemácias. Os micro tubos foram agitados por 2 minutos, e centrifugados por 2 minutos a 14.000xg. O sobrenadante foi descartado e o processo se repetiu até a obtenção de um precipitado claro, sem vestígios de hemoglobina. Após esta etapa, foram adicionados às amostras 80µL de tampão de proteinase K®, 40µL de proteinase K®20U/mg (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), 20µL de SDS®(sulfato dodecil de sódio, Sigma Chemical CO, Steinheim, Germany) a 20v/v e 240µL de água ultrapura, com homogeneização em Vortex por 15 segundos. Os microtubos foram incubados em banho-maria a 56ºC por 40 minutos, com uma leve agitação em Vortex aos 20 minutos e, retirados após esse tempo, a fim de atingirem a temperatura ambiente. Foram adicionados 100µL de solução saturada de NaCl (6M), com agitação em Vortex e centrifugação por 5 minutos a 14.000xg. O sobrenadante foi transferido para outro micro