Obtenção do extrato bruto

Graduação em Biotecnologia
Disciplina de Proteômica
Caroline Rizzi
Doutoranda em Biotecnologia -UFPel

PROPRIEDADES DAS PROTEÍNAS

Propriedades de proteínas

Ponto isoelétrico
É no ponto isoelétrico que a proteína apresenta-se com menor solubilidade!!!!

Importância do cálculo do pI
1.
2.




Vector NTI
Expasy
Focalização isoelétrica
Solubilidade
Purificação:
 Proteínas ácidas:
 pH>pI: troca iônica

 Proteínas básicas:
 pH 0,1 u): concentrações acima de 50mM
Reações enzimáticas: cuidar a liberação ou captação de prótons

*N. E. Good. G. D. Winget, W. Winter, T. N.
Connolly, S. Izawa, and R. M. M. Singh,
Biochernisrry 5, 467 (1966)

Aditivos ao tampão

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

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



NaCl;
EDTA;
Detergentes;
Inibidores de proteases;
Agentes redutores;
DNAses e RNAses;
Estabilizantes;
Conservantes.

Detergentes
 Compostos anfifílicos;
 Formação de micelas;
 Agentes solubilizantes e desagregantes;  A maioria não absorve a 280 nm;  Estabilidade, funcionalidade, estrutura e solubilidade da proteína: não garantidas;
 Concentração final de 0,01 a
5%.

CMC: concentração onde há o início da formação das micelas detergente

Dependendo da concentração

Detergentes: iônicos e não iônicos Detergentes iônicos

micelas

Proteínas integrais da membrana Complexos não micelares

Sarcosil

Detergentes não iônicos

Cetab
Cetyltrimethylammonium
bromide

SDS
Dodecil sulfato de sódio Triton X-100
(polyoxyethylene (9,5) p-t-octylphenol)

Deoxicolato de sódio

Octilglicosídeo
(octyl-b-D-glucopyranoside)

Uréia
 Desnaturação e solubilização de proteínas;
 Barata e de fácil remoção;
 Eleva a solubilidade de grupos da proteína na solução aquosa, através da acomodação dos grupos apolares;
 Guanidina e tiouréia;
 A tiouréia é um agente mais eficiente que a uréia, mas pouco solúvel em água;
 A mistura uréia- tiouréia é bastante eficiente;
 Concentrações de 6