Nathalia

Tipos de cromatografia

Cromatografia de exclusãomolecular
Cromatografia por troca iônica
Cromatografia por interaçãohidrofóbica
Cromatografia por fase reversa
Cromatografia de afinidade

Captura
Objetivo: Isolar, concentrar e manter atividade
- Principais técnicas cromatográficas: TrocaIônica e Afinidade
- Resinas de alta Capacidade
- Separar de contaminantes críticos: DNA,proteases, etcPurificação intermediária Objetivo: retirar a maior parte das impurezas
Separar contaminantes de propriedades similares
Usar técnicas complementares: Troca iônica,afinidade ou interação hidrofóbica. Polimento

Objetivo: aumentar a pureza e preparar para armazenamento
Obs:sacrifica e dilui a amostra

Principal técnica: Filtração em Gel – CEM

1ª etapa
INÍCIO
PREPARAÇÃO - EXTRAÇÃO - CLARIFICAÇÃO Isolamento inicial da amostra protéica do material de origem;
Lise das células/tecido de origem:
- Lise por Sonicação - Lise por pressão -Trituração do tecid
Preparação da amostra para as etapas cromatográficas:

1) Adição de aditivos (Detergentes);
2) Ajuste do pH da amostra;
3) Adição de Sais;
4) Centrifugações;
5) Filtrações;
6) Diálises;

CLARIFICAÇÃO
Centrifugação, Filtração, ultrafiltração e Gelfiltração
Ultracentrifugação
Precipitação em sulfato de amônio
Salting out” estrutura da água
Diálise
Preparação da amostra para etapas subseqüentes Somente se necessário

Separação por características:características:
Tamanho, solubilidade, carga e afinidade.

Cromatografia de exclusão molecular
Separação pela Massa Molecular
Proteínas maiores eluem primeiro Menor caminho a percorrer

Cromatografia por FaseCromatografia por FaseReversaReversa
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Eluição por solvente orgânico Podedesnaturar a proteína

- Comprometimento da Estrutura 3D

Cromatografia deCromatografia deafinidadeafinidade

Proteínas são componentes essenciais para a vida

Compostos biológicos contém são misturas complexas com milhares de proteínas