Método de bradford

Quantificação de proteína total pelo método de Bradford

1. Calcule a concentração de proteína em cada um dos tubos 1 a 6, após as misturas efetuadas no ponto 2.

Tubo 1:

Tubo 2:

Tubo 3:

Tubo 4:

Tubo 5:

Tubo 6:

2. Represente graficamente a absorvância em função da concentração de proteína calculada anteriormente e determine a equação da reta que melhor se ajusta aos pontos experimentais.

Concentração mg/mL
Absorvância
0
0
0,2
0,189
0,4
0,319
0,6
0,417
0,8
0,664
1
0,727

Visto que os valores de absorvância das concentrações 0,6 mg/mL e 0,8 mg/mL são os que mais se desviam da reta, desprezamos estes valores para obtermos um melhor coeficiente de correlação.

Gráfico 1: Absorvância em função da concentração (mg/mL) sem o valor de concentração 0,6 mg/mL e 0,8 mg/mL (valores desprezados).

3. Calcule a concentração de proteína na amostra de concentração desconhecida.

Ctubo7= ?
A= 0,524

Usando a equação da reta (:

4. Discuta se o ajuste dos pontos experimentais a uma reta é satisfatório e relacione-o com a lei de Lambert-Beer. Este ajuste será aplicável para qualquer intervalo de concentração?

A lei de Lambert-Beer relaciona em ordem direta a absorvância de uma certa solução e a concentração da proteína nessa solução. Verificamos que o aumento da concentração se traduz num aumento de absorvância e que, apesar de não ser um aumento exactamente proporcional os pontos obtidos experimentalmente encontram-se próximos da reta de tendência.
O R2 tem um valor de 0,9955 (e não 1) devido a terem ocorrido erros durante a realização da experiência. Como este valor não é muito afastado de 1, verificamos que estes pontos se adequam à reta encontrada.
O facto de R2 ser igual a 1, significava que a linearidade era perfeita, isto é, a equação tomaria a forma y=mx+b y=mx sendo o valor de b=0, ou seja, o valor esperado para a