método de bradford

CURSO TECNICO EM BIOTECNOLOGIA
DISCIPLINA DE PROCESSOS BIOQUÍMICOS
PROF.ª BIANCA PFAFFENSELLER

Prática V:
QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS PELO
MÉTODO DE BRADFORD

ALUNAS: JESSIKA LARA, PAULA SOARES E THAYANA DA SILVA
NOTA = 8,2 (o relatório está mais completo comparado ao anterior, com mais informações na introdução e discussão. Mas, falta vcs revisarem o texto, tem trechos confusos, repetidos, soltos. Sugiro tb rever a formatação do texto)

Porto Alegre, 22 de abril de 2014

Introdução: O método de Bradford baseia-se na observação do “Coomassie brilliant blue” BG-250 que estabiliza a forma aniônica do corante, causando uma visível mudança de coloração, inicialmente castanho para tons de azul, de acordo com a concentração da proteína. O complexo é formado em cerca de 2 minutos e fica disperso na solução por uma mais, mais ou menos.
Este método é baseado na interação entre o corante BG-250 e macromoléculas de proteínas que contém aminoácidos de cadeias laterais básicas ou aromáticas. Para isto ocorrer, a proteína deve ter estrutura macromolecular, ou seja, de 8-9 ligações peptídicas no mínimo. No pH de reação, a interação entre a proteína de alto peso molecular e o corante BG-250 provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para a forma aniônica, que absorve fortemente em 595 nm. A comparação dos resultados com uma curva padrão (de valores já conhecidos), permite a determinação da concentração da proteína em estudo.
É mais indicado para a detecção e quantificação de proteínas (em meios sem detergentes) totais, tais como: plasma ou soro sanguíneo, liquor, saliva humana, produtos alimentícios, leite, leite humano, tecidos de plantas e urina. É simples, preciso e rápido. O método requer poucas etapas de misturas, não necessita de aquecimento e possui uma grande estabilidade colorimétrica, com pouca interferência de cátions como sódio ou potássio.
Alguns interferentes: Lipídios, detergentes, melanina, açucares, RNA,