microscopia

18/03/2014

Tecnologia da biologia celular e molecular: microscopia Conhecimento sobre células Aperfeiçoamento dos métodos de investigação Microscópio óptico
Microscópio de luz
Todo ser vivo é constituído de células

Técnicas citoquímicas
+

Microscópio eletrônico

1

18/03/2014

1- Fixação

Confecção de cortes para estudo microscópico Ideal:

Preservar morfologia e composição química célula mesma estrutura de quando estava viva

Manter o mais próximo da célula “in vivo”
Alterações
produzidas pela técnica utilizada
Elimina com qualquer reação bioquímica em andamento Artefatos

1- Fixação

Evitar a autólise
Fixadores

• Formol (ML)
• Glutaraldeído (ME)
• Tetróxido de ósmio (ME)

Impedir a degradação do material por fungos e bactérias
Endurecer as células para resistirem aos procedimentos seguintes
Melhorar a interação do material Corantes
(microscopia de luz)

Contraste
(microscopia
eletrônica)

1- Fixação

2. Desidratação

Lavagem
Fixe tecido o mais rápido
Evite: manipular em excesso os tecidos

Solução como etanol ou acetona

Fixe o material por um período de 6 a 24 horas
Não fixe fragmentos com mais de 6 mm de espessura
Recipiente de boca larga (tipo frasco de maionese)

Retirar a água para que a resina penetre nas estruturas Use sempre um volume de fixador superior a 10 vezes o volume da peça

2

18/03/2014

4. Microtomia

3. Inclusão

Obter cortes sucessivos, delgados e uniformes
Impregnação do tecido com uma substância de consistência firme
Espessura

Facilitar corte de fragmentos muito finos

Microscopia eletrônica Materiais de inclusão:

Microscopia de luz Micrótomo

Parafina: Utilizada em ML
Resinas (Glicol metacrilato, epóxi): ML e ME

1a6 micrômetros (µm)

0,02 a 0,1 µm

5. Coloração

Material processado são incolores e de baixo contraste Visualizar os componentes celulares

Os opostos se atraem

5. Coloração