micro

Objetivo:
Observamos e interpretamos o mecanismo de reação de Gram como um método de coloração diferencial.

Material e Métodos
Lâmina
Bico de Bunsen
Alça de platina
Água destilada
Meia de cultura Sólida
Cristal Violeta
Lugol
Álcool – acetona
Fucsina gram IV
Papel toalha
Microscópio
Óleo para imersão
Flambou se uma alça, deixando esfriar, mantendo próxima a chama, retiramos uma gota de água destilada e depositamos sobre a lâmina, flambamos novamente a alça, esperamos esfriar e retiramos uma amostra da cultura sólida. Levamos A amostra até a gota de água depositada sobre a lâmina e homogeneizamos com movimentos circulares, para obter um esfregaço de forma oval, uniforme e fino. Fixamos o esfregaço, passando a lamina na chama do bico de bunsen, como se cortando a chama, repetimos esse procedimento três vezes, para q o material ficasse bem aderido.
Colocamos a lamina com o esfregaço sobre um suporte, cobrimos a lamina com cristal violeta (gram1) e deixamos agir por 1 minuto, lavamos a lâmina em jato fraco de água corrente, do lado contrario do esfregaço. Cobrimos a lamina com lugol (gram2), deixamos agir por um minuto e depois lavamos novamente a lâmina. Cobrimos a lâmina com a solução de álcool-acetona (gram3), verificamos a coloração que deveria ocorrer em cerca de 20 segundos. Cobrimos a lamina com fuscina (gram IV), deixamos agir por 30 segundos e novamente lavamos a lâmina. Secamos inicialmente o lado da lâmina oposto ao esfregaço com papel toalha e em seguida secamos o restante da lâmina na chama do bico de bunsen (como se estivesse “cortando” a chama). Levamos a lâmina ao microscópico e observamos em objetiva de imersão. Colocando uma gota de óleo para imersão sobre o esfregaço.

Resultado
Bactérias G+ - coradas em roxo.
Bactérias G- -coradas em vermelho.

Conclusão
Essa técnica de coloração permite então a