MD311 GEN TICA MOLECULAR APLICADA II

MÉTODOS
DIAGNÓSTICOS

Unicamp
Fernando Augusto de Lima Marson

Doutor em Pediatria – Genética Médica
Pesquisador – GDPOC e Genética Médica, (Capes) e CIPED

2015

Genética

Tempo
Condições

Pergunta

Técnica

Viabilidade

Sensibilidade
Especificidade

RESPOSTA

Custo X Benefício

EXPERIÊNCIA

FERRAMENTA

PERGUNTA

RESULTADO

PARCERIA

Avanços da Biologia Molecular
1. Investigação
Genética reversa (fenótipo resultante de uma mutação), associação estruturafunção, mutagênese, carcinogênese, estudos antropológicos, genoma/exoma humano, marcadores clínicos
2. Diagnóstico molecular

3. Monitoração terapêutica
4. Terapia
Proteínas recombinantes (hormônios, fatores de crescimento, fatores da coagulação) Terapia gênica

Diagnóstico Molecular
Indivíduos afetados - diagnóstico
Indivíduos assintomáticos - preditivo
Pré-Natal

Pré-Implantação
Pré-fecundação

Aconselhamento genético

Métodos de biologia molecular aplicações diagnósticas

Doenças infecciosas
Doenças genéticas (ex. hereditárias)
Oncologia
Identificação humana

Extração de DNA
Leucócitos

Células nucleadas

Mucosa oral

Bulbo capilar
Sêmen
Osso

Etc

Técnica

PCR
MgCl2
Tampão

H2O
Primers
dNTP

DNA

Taq pol.

MÚLTIPLAS CÓPIAS SÓ
DA REGIÃO DE INTERESSE

TA = TM – 5TM= 4(G+C)+ 2(A+T)

TERMOCICLADOR AUTOMÁTICO

ELETROFORESE

INFECCIOSAS
TOXOPLASMOSE
88pb 

+ C+ C- C f

+

CITOMEGALOVÍRUS
159pb



+

C-

C+

ENZIMAS DE RESTRIÇÃO
Microorganismo

Nome

Sequência

Haemophilus aegyptius

Hae III

GG CC
CC GG

Thermus aquaticus

Taq I

T CGA
AGC T

Escherichia coli

EcoR I

G AATTC
CTTAA G

Microcoleus

Mst II

CC TNAG
GANT CC

Representação esquemática do gene da MTHFR (METILENOTETRAHIDROFOLATO REDUTASE)
Localização: Cromossomo 1 (1p 36.3)

Região codificadora (Exons)

Sequências intercalares (Introns)

Mutações descritas
Mutação

Mudança de pb Mudança de
Aminoácido

Localização

Abole/cria sítio de restrição da endonuclease

C1081T

CT

ArgCys

exon 6

HhaI

G164C

GC

ArgPro

C677T

CT

AlaVal