Marcha Daisy DIVMS

Protocolo - DIVMS –DAISY
1) Reagentes
A) Solução tampão A: g/L
KH2PO4 10,0
MgSO4 7H2O 0,5
NaCl 0,5
CaCl2 2H2O 0,1
Urea (grau reagente) 0,5

B) Solução tampão B
Na2CO3 15,0
Na2S 9H2O 1,0

C) Solução de detergente neutro
D) HCl 7,4%
E) Pepsina 1:10.000

2) Materiais
A) Incubadora Daisy;
B) Dispositivo de filtração – F57 (sacos filtro);
C) Seladora dos sacos – 1915/1920 – Seladora a calor;
D) Térmica;
E) Ankon (analisador de fibra).

3) Procedimentos
3.1) Preparação das bolsas e amostras
Pré-lavar a bolsa filtro F57 com acetona por 3 a 5 minutos e deixar secar. A acetona irá remover os surfactantes que inibem a digestão pela microbiana. Pesar cada saquinho vazio e anotar o valor de cada um que corresponderá ao seu peso 1.
Zerar a balança e pesar 0,25g de amostra (Peso 2) diretamente em cada bolsa para análises com período de 24 horas.
NOTA: Para as análises realizadas adotando 48 horas de incubação, uma amostra de 0,5g é aceitável.
Fechar e selar com calor os sacos, com tempo de aproximadamente 2,5s, após a luz vermelha de a seladora desligar contar 10 segundas e levantar a alavanca. Não retirar o saquinho no primeiro momento, aguardar esfriar um pouco e retirar com cuidado.
Após selados, os saquinhos podem ser inseridos nas jarras de digestão da Daisy (até 25 amostras por jarra).
NOTA: As jarras devem estar devidamente limpas e riçadas com água destilada.
As amostras devem ser distribuídas uniformemente em ambos os lados do divisor frasco de digestão. Incluir pelo menos um saco selado correspondendo ao branco para o fator de correção (C1), em cada jarro de digestão.

3.2) Preparação de uma solução tampão (combinado)
A) Pré aquecer a 39oC ambas as soluções tampões (A e B). Em um recipiente separado adicionar aproximadamente 266ml de solução B para 1330 ml de solução A (1:5). A quantidade exata de A e B deve ser ajustado para se obter um pH final de 6,8 a 39oC. Caso necessário ajustar pH com CO2. Adicionar 1600 ml de uma mistura combinada