Laminas

UFSC

CCB

Técnicas Básicas para Confecção de Lâminas Histológicas para Microscopia de Luz

Lâminas Temporárias
• Duram em média de 1 a 5 dias
Ex: Mitose de raiz de cebola

Lâminas Semi-permanentes
• Duram em média de 1 a 5 anos. • Ex. Esfregaço sanguíneo

Lâminas Permanentes
• Podem durar mais de 20 anos.

Noções de Preparo de Lâminas
• • • • • • • • • • • • Coleta do Material Biológico Fixação Desidratação Diafanização Embebição e inclusão em parafina Corte Desparifinização Hidratação Coloração Desidratação Montagem da lâmina com resina

Fixação e Fixadores
1. Fixação
Tipos de fixadores: Fixadores físicos: utilizam agentes físicos: temperatura
(congelamento).

Fixadores químicos: utilizam compostos químicos com propriedade de preservação.

Fixação Química
Fixadores não denaturantes de proteínas: Aldeídos (formaldeído; glutaraldeído; glioxal; acroleína) Fixadores denaturantes de proteínas: Alcoois (metanol, etanol, propanol..., ácido acético também) Fixadores oxidantes: tetróxido de ósmio; permanganato de potássio, dicromato de potássio. Fixadores de mecanismos desconhecidos: cloreto de mercúrio; ácido pícrico.

Misturas Fixadoras: Exemplos
BOUIN: Formol (25ml) + solução saturada de ácido pícrico (75 ml) + ácido acético (5 ml). HELLY: dicloreto de mercúrio (5 g) + dicromato de potássio (2,5 g) + sulfato de sódio (1 g) água dest. )100 ml) + formol 4% (5 ml)
Obs: O formol preserva muito bem proteínas e álcool/ácido acético preservam bem ácidos nucléicos.

Propriedades de uma boa fixação
•PRESERVAR o material biológico deixando-o o mais próximo possível de quando estava vivo. •Impedir a AUTÓLISE (autodegradação). •Evitar a PROLIFERAÇÃO de microorganismos (bactérias e fungos). •Tornar o material biológico mais RESISTENTE a tratamentos e manipulações posteriores (cortes, inclusões, hidratações e desidratações...). •Preparar ou aumentar determinados corantes. a AFINIDADE para

Lâminas Permanentes
2. Desidratação
ÁLCOOL