Laminas Permanentes

Páginas: 5 (1152 palavras) Publicado: 17 de março de 2014
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Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul
Unidade de Ensino de Ivinhema – MS
Curso Ciências Biológicas - 2007
Projeto de Ensino Práticas de Biologia Celular – Citologia & Citogenética
Roteiro de aula prática N° 23: Lâminas Permanentes.
Resumo
Verificar o contraste de coloração em tecidos e na descrição da morfologia celular, por meio do uso de
metodologia de fixação, hidratação,coloração e desidratação para lâminas permanentes de tecidos animais. Esse
tipo de técnica permite exame adequado em biologia celular e histologia.
Introdução
A hematoxilina é um composto que se obtém da planta leguminosa Haematoxylum campechianum,
conhecida também pelo nome de Pau Campeche. É um produto natural que ao ser oxidado resulta numa
substância de cor azul-púrpura escura denominadahemateína. É utilizada em histologia para colorir os
componentes aniônicos (ácidos) dos tecidos, aos quais dá uma coloração violeta. Colore intensamente os núcleos
das células, devido ao fato de que estes contêm ácidos nucléicos ricos em radicais ácidos. As estruturas que a
hematoxilina colore são chamadas basofílicas. Como é obtida da planta e logo deve sofrer o processo de
oxidação, suacapacidade de tingimento é muito limitada. Portanto, deve combinar-se com íons metálicos,
especialmente os sais de ferro (III) o alumínio (II), que atuam como mordentes. Ainda que a hematoxilina seja
um sal neutro, se caracteriza por ser um corante básico, já que o componente cromógeno reside no complexo
catiônico (básico) da mesma. É de se notar que a coloração histológica pela hematoxilina não indicatanto a
constituição química dos componentes celulares, senão a densidade de cargas elétricas negativas dos mesmos.
Estrutura da hematoxilina
A Eosina Amarelada é um corante vermelho arosado com leve tom amarelado com fluorescência róseoalaranjada
quando em solução alcóolica ou aquosa, bordô escuro quando sólido, resultante da ação do bromo
sobre a fluoresceína. É usado em conjunto comoutros corantes (tal como o Orange G, o Verde Luz Amarelado e
a Fucsina Ácida) na coloração de citoplasma, colágeno e fibras musculares para exame sob o microscópio. É um
corante ácido que confere cor vermelha em tais colorações. Na célula, sua estrutura aniônica (-) liga-se a
estruturas acidófilas ou eosinófilas corando o citoplasma e outras estruturas que têm afinidade com a porção
básica(proteínas citoplasmáticas, hemoglobina, mitocôndrias, alguns grânulos de armazenagem e secreção) -
estruturas catiogênicas (+).
A Eosina Azul de Metileno tem um muito leve tom azulado. Os dois corantes são intercambiáveis, e é
comum o uso de um pelo outro.
Essa aula tem como principal objetivo, verificar o contraste de coloração em tecidos e na descrição da
morfologia celular, por meio do uso demetodologia de fixação, hidratação, coloração e desidratação para
lâminas permanentes de tecidos animais. Esse tipo de técnica permite exame adequado em biologia celular e
histologia.
Eosina Amarelada Eosina Azul de Metileno
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Material e Equipamentos
Instrumentos
Lâmina, lamínula, microscópio, lâminas de cortar novas, Béquer, placa de petri, pincel fino, estufa
Químico
Parafina histológica;Água destilada (H2Od); ácido acético 45%; Solução Carnoy: álcool etílico absoluto-ácido
acético glacial (3:1); séries de etanol, 50, 70, 80, 95 e 100% (v/v) (100 mL de cada solução alcoólica), Xilol;
Corantes como Azul de toluidina 0,20%, pH 4,0 (C15H16ClN3S); azul de metileno 0,1% (C16H18ClN3S. 3H2O)
filtrados, e hematoxilina e eosina.
Biológico
Vísceras frescas de aves (coração, rim efígado de frango), retirar e fixar rapidamente em Carnoy.
Procedimentos
Sacrificar o material biológico em éter etílico (frasco com um chumaço de algodão embebido com éter, 4-5 min).
Retirar e/ou cortar o material biológico com uso de bisturi (navalha ou lâmina de barbear) em pedaços pequenos
(3-6) mm, caso seja muito grande o material.
Fixar em Solução Carnoy, 10 a 20 min - três (3) a cinco...
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