Isolamento

UNIVERSIDADE FEDERAL DO ABC
Centro de Engenharia, Modelagem e Ciências Sociais Aplicadas

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
APOSTILA DE AULA PRÁTICA
(EN 2105)

Prof. Dr. Dácio Roberto Matheus
Prof. Dra. Luísa Helena dos S. Oliveira

Santo André, SP
1 º Quadrimestre/2013

PRÁTICA 1: Isolamento de microrganismos do solo
Roteiro de aula

1. Microrganismos do Solo
1.1. Bases Científicas
O primeiro procedimento para determinar a microbiota de solo foi a observação em microscopia com o auxilio de corantes, porém este método é dificultado pelo volume de partículas que atrapalham a visualização além da dificuldade de separar organismos vivos de mortos. Os métodos mais modernos incluem a técnica de diluição em série e plaqueamento com contagem de colônias, partindo do pressuposto que cada colônia foi formada por um único organismo ou pequeno grupo de organismos.
A semeadura mais comum neste tipo de procedimento é conhecida como “pour plate” ou semeadura em profundidade. Neste tipo de semeadura a amostra é vertida na placa de Petri antes do meio de cultura e depois a amostra é incubada e as colônias formadas são contadas.
Tira-se a média do número de colônias e multiplica-se pelo fator de diluição. O resultado é expresso em Unidades Formadoras de Colônias por mL (UFC/mL).

1.2. Objetivo
Quantificar a densidade de bactérias e fungos (por UFC) em amostras de solos.
Treinar a técnica de diluição e semeadura por “pour plate”.

1.3. Material e procedimentos
Material:
o Amostra de solo, o 4 placas de petri, o 1 pipeta automática de 1 mL, o 4 tubos de ensaio com capacidade para pelo menos 20 mL o Luria Bertani Agar (LBA) o Meio Martin, o 200 mL de solução salina 0,7% NaCl esterilizado, o 1 frasco esterilizado com capacidade para 90 mL de solução salina o bico de Bunsen, o Estufa de incubação; o Canetas para retroprojetor (preta, verde, azul ou vermelho).

Procedimentos
 Coletar amostra de solo, cerca de 50 gr em frasco estéril.
 Marcar as