Identificação da Salmonella

Materiais e Técnicas para identificação de Salmonella

• Amostra do iogurte
• Solução Verde brilhante 0,1%
• Caldo Triptona 1%
• Caldo Selenito Cistina (SC)
• Caldo Malonato
• Caldo Rapapport Vassiliadis (RV)
• Ágar vermelho de Fenol-1% lactose
• Ágar Verde Brilhante (BGA)
• Ágar vermelho de Fenol-1% glicose
• Ágar Salmonella-Shigella (SSA)
• Ágar vermelho de Fenol-1% sacarose
• Ágar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD)
• Ágar Citrato de Simmons
• Ágar Tríplice Açúcar Ferro (TSI)
• Reagente de Kovacs
Equipamento e Vidraria:
• Estufa 35 ± 1°C
• Tubos de ensaio
• Estufa 41,5 ± 1°C
• Alça e agulha de Níquel Cromo
• Placas de Petri
• Estantes para tubos
• Pipetas graduadas de 1 mL, 2 mL e 10 mL
• Pipetadores
Procedimento:
1- Pré-enriquecimento:
Pipetar 25 mL da amostra a ser analisada e 0,25 mL de Solução verde brilhante 0,1% em um frasco com 225 mL de água peptonada, incubar a 35°C/24h.
2- Enriquecimento seletivo:

-Agitar levemente a cultura de pré-enriquecimento. Transferir 0,1 mL da cultura para um tubo contendo 10 mL de caldo Rapapport Vassiliadis (RV) e 1,5 mL da cultura para um tubo com 20 mL de Caldo Selenito Cistina (SC).
-Incubar os tubos a 35°C/24h;

3- Isolamento das colônias:

-Homogeneizar os tubos de RV e SC, agitando levemente. Semear, por esgotamento, uma alçada de cada uma das culturas de enriquecimento seletivo, em superfície dos seguintes meios seletivos: Ágar Verde Brilhante (BGA), Ágar SS e Ágar XLD.
- Incubar as placas a 35°C/24h.

4- Análise das colônias:

-Ágar Verde brilhante (BGA) - colônias rosadas; alcalinizam o meio e precipitam o corante vermelho de fenol.
-Ágar SS - Colônias transparentes com ponto negro. Lactose negativa, com produção de gás sulfídrico (H2S)
-Ágar XLD - Colônias rosa escuro, com ou sem centro preto e brilho metálico.

5- Seleção das colônias:

-Observar as placas que contenham colônias típicas de Salmonella. Selecionar 4 colônias e repicar em cada um dos tubos de