GRAM POSITIVO E GRAM NEGATIVO

Páginas: 6 (1274 palavras) Publicado: 15 de abril de 2015





COLORAÇÃO DE GRAM E ANÁLISE MICROSCÓPICA PARA IDENTIFICAÇÃO DE MICRORGANISMOS GRAM POSITIVOS E GRAM NEGATIVOS.






Discente: Dini Carla da Silva, Morocha Okowinsky Mulatti
Disciplina/Semestre: Microbiologia Geral / 6º semestre.
Docente: Lara M. Ferracin.



ARAPONGAS
2014
INTRODUÇÃO:
Coloração de Gram é uma técnica de coloração para diferenciação de microrganismos através dascores, para serem observados em microscópio óptico. A técnica recebeu este nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram.
Por volta de 1884, Hans Gram observou que as bactérias, após serem tratadas com diferentes corantes, adquiriram cores diferenciadas. Assim, as que ficavam roxas foram classificadas de Gram-positivas, e as que ficavam vermelhas, foram chamadas deGram-negativas. Apesar de descrita há mais de 200 anos (1884) por Christian Gram, a coloração de Gram é uma ferramenta rápida e barata de diagnóstico do tipo de parede celular da bactéria em estudo, ainda amplamente utilizada.
A coloração de Gram se baseia em algumas diferenças estruturais existentes entre a parede celular de uma bactéria Gram negativa e de uma Gram positiva. A principal delas é que aparede celular de uma bactéria Gram positiva, embora mais espessa, é quimicamente mais simples, ou seja, apresenta predominantemente um único tipo de macromolécula (90% peptidioglicano). Veja figura abaixo:

Figura 1: Gram positivas e Gram negativas.
Já a parede celular de uma bactéria Gram negativa é mais complexa. É formada por uma ou poucas camadas de peptidioglicano e por uma membrana externa,separadas entre si por um espaço periplásmico, contendo uma série de enzimas e proteínas. Enquanto nas Gram positivas o peptidioglicano representa de 15 a 50% da massa seca da célula, nas Gram negativas ele representa no máximo 5%.
Essas informações são importantes, pois é a quantidade de interligações existentes entre as cadeias de peptidioglicano e o comprimento dessas cadeias que determinará aforma da célula, e consequentemente, a forma da bactéria. Tanto as Gram positivas quanto as Gram negativas possuem, no entanto, uma característica em comum: suas membranas são constituídas de uma bicamada fosfolipídica.
OBJETIVO:
Aprender a realizar a coloração de Gram e compreender porque determinadas bactérias e leveduras se comportam como Gram positivas ou Gram negativas.
METODO DE APLICAÇÃO:Esfregaço para matérias em meio líquido:
Flambou-se a alça de platina, resfriou-se em um tubo com água esterilizada. A partir daí todo procedimento foi realizado próximo da chama do bico de Bunsen. Em seguida, retirou-se uma amostra da cultura com a alça e foi depositado no centro da lâmina, onde esse material foi espalhado com a alça em movimentos circulares em um só sentido, obtendo-se assim umesfregaço de forma oval, uniforme e fino. Após fixou-se o esfregaço passando a lâmina na chama do bico de Bunsen, por 3 vezes, para que o material fique bem aderido.
Esfregaço para matérias em meio sólido:
Flambou-se a alça de platina. A partir daí todo procedimento foi realizado próximo da chama do bico de Bunsen. Em seguida, foi retirada uma gota de água estéril e depositou-se na lâmina. Foinovamente flambado a alça, resfriou-se e assim foi coletada uma amostra da cultura sólida, onde foi levada até a água depositada sobre a lâmina. Foi homogeneizado com movimentos circulares, obtendo-se um esfregaço oval, uniforme. Após fixou-se o esfregaço passando a lâmina na chama do bico de Bunsen, por 3 vezes, para que o material fique bem aderido.
Coloração de Gram:
Colocou-se a lâmina com oesfregaço sobre um suporte feito com 4 barras de pipetas graduadas na pia. Onde foi realizada a coloração seguindo-se a seguinte sequencia:
1- Cobriu-se a lâmina com cristal violeta onde foi deixado agir por 1minuto.
2- A lâmina foi lavada em jato fraco de água corrente da pia, dos dois lados.
3- Cobriu-se então após lavagem da lâmina com lugol, onde foi deixado agir por 1 minuto e depois foi lavada...
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