extração de DNA

Páginas: 5 (1005 palavras) Publicado: 27 de outubro de 2014
INTRODUÇÃO
É fato que as aplicações das técnicas de DNA recombinante em laboratórios de análises clínicas estão se tornando altamente evidentes, especialmente para a análise do diagnóstico das várias doenças genéticas, realização de testes de paternidade e outras mais. Este campo de estudo está rapidamente se expandindo e novas análises estão sendo desenvolvidas.
Existem várias técnicas paraextração do DNA, que utilizam diferentes metodologias e espécimes biológicos. O sangue é muito utilizado para extração de DNA porque é fonte abundante de informação genética e por fornecer amostra fresca para análise (a maioria dos testes de DNA para o diagnóstico envolve a extração de DNA dos leucócitos humanos). No entanto, muitos outros materiais podem ser efetivamente analisados: célulasepiteliais da mucosa oral; unhas, pêlos e fios de cabelo (região do bulbo capilar); manchas de material biológico (líquido seminal, urina, saliva) em vidro, faca, têxtil; ossos carbonizados, ossadas ou dentes; material anatomopatológico; e inclusive células deixadas por impressão digital em selos, filtros de cigarro, copos, talheres e telefone.
A extração do DNA a partir dos pêlos consiste de umasérie de etapas, que se baseiam na eliminação do material não passível de ser analisado, até a obtenção do ácido nucléico em questão.
O passo seguinte, depois de extraído o DNA é a análise. Esta pode ser feita através de eletroforese em gel de poliacrilamida posteriormente corado em gel de agarose, corado por brometo de etídio. Em qualquer uma delas, o material amplificado é visualizado como umabanda, a ser analisada de acordo com o seu peso molecular.
A eletroforese consiste na separação de moléculas ionizadas, de acordo com suas cargas elétricas e pesos moleculares em campo elétrico. Moléculas orgânicas como RNA, DNA e proteínas são separadas pela migração destas em um gel durante a aplicação de um potencial elétrico. O princípio da eletroforese utilizada para separação de DNA, porexemplo, baseia-se na carga total negativa do DNA (conferida pelos grupamentos fosfatos). Sendo assim, as moléculas de DNA tendem a migrar em direção ao pólo positivo (cátodo).
Uma molécula de DNA, quando exposta a um campo elétrico, migra para o eletrodo na velocidade ou mobilidade eletroforética, proporcional a força do campo e a carga líquida da molécula. A mobilidade eletroforética é tambéminversamente proporcional ao coeficiente friccional da molécula, que, por sua vez, é em função do tamanho e forma da molécula, e da viscosidade do meio.
Nessa técnica é utilizada uma cuba com dois compartimentos, eletrodos para condução de eletricidade. Entre os compartimentos da cuba é encaixado o gel que deve ficar submerso. Pequenos poços são feitos no gel durante sua preparação com pentes. Asamostras são pipetadas nesses poços. Essas amostras devem ser previamente misturadas a um corante, para a migração, aplica-se voltagem e corrente elétrica ao sistema.
OBJETIVO
Isolar amostras de DNA a partir de células dos pêlos ou cabelos para a análise dos fragmentos por meio da técnica de eletroforese em gel de agarose.
EspecÍficos
Realizar a técnica de extração e purificação de DNA; eeletroforese em gel de agarose;
Conhecer os materiais necessários para a realização destas técnicas;
Obter conhecimento sobre a realização da técnica de extração e purificação de DNA; e eletroforese em gel de agarose.
MATERIAIS
. Extração de DNA:
Cabelo do couro cabeludo
Microtúbulos;
Balança;
Banho Maria, 37 ° C;
Banho de água, 65 ° C (opcional, para realizar a re-hidratação rápida do DNA);Microondas;
Pipeta
Pentes;
Micropólio;
. Eletroforese:
Amostra do cabelo;
Cuba de eletroforese;
Brometo de etídio(corante);
Tbe;
Tampão de Tris;
Fonte de eletroforese;
Gel de agarose;
Marcador de alto peso molecular;
Tampão de Azul de Bromofenol;
Suporte com filme de PVC;
Transluminador.
3. PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS
Foi coletado algumas amostras dos fios de cabelos e foi...
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