EXTRAÇÃO DE DNA

Páginas: 5 (1007 palavras) Publicado: 6 de outubro de 2014
UNIVERSIDADE FEDERAL DA FRONTEIRA SUL – UFFS
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS LICENCIATURA






ALANA SOARES DOS SANTOS
MAYRA ALONÇO





RELATÓRIO DE BIOQUÍMICA
AULA PRÁTICA 6 – EXTRAÇÃO DNA VEGETAL









REALEZA, 4 DE JUNHO, 2014.
EXTRAÇÃO DE DNA VEGETAL – CASCA BANANA

INTRODUÇÃO
Os ácidos nucleicos são moléculas com extensas cadeias carbônicas, formadas pornucleotídeos (figura 1): um grupamento fosfato, uma pentose e uma base nitrogenada, constituindo o material genético de todos os seres vivos (RIBEIRO).


Figura - Nucleotídeo DNA

Conforme citado por GOUVEIA & REGITANO, podem-se obter DNA a partir de inúmeros tipos de tecidos e células, e existe uma infinidade de protocolos para a realização de tal procedimento. O primeiro relato sobre isolamento deDNA foi realizado por Friedrich Miescher, que lisou células de pus em uma solução alcalina e precipitou o material nuclear que posteriormente seria conhecido como DNA, e foi chamado de nucleina. (GOUVEIA & REGITANO).
Basicamente, para extrair o DNA vegetal, é preciso dissociar o tecido da planta, romper a parede celular e as membranas plasmática e nuclear, remover as proteínas e isolar o DNA. Éuma metodologia simples, que requer o detergente liquido para desnaturar as membranas lipídicas, e água com sal para neutralizar o DNA, que precipitara ao se adicionar álcool gelado, isso porque estará menos solúvel em solução alcoólica. (FURLAN et al., 2010, p.34).
Assim, a finalidade deste trabalho é testar o protocolo de extração de DNA vegetal, em nosso caso com a casca de banana.

OBJETIVOExtrair o DNA de células animais ou vegetais.

MATERIAL

- Banho-maria a 60 – 70oC
- 1 caixa de isopor pequena contendo gelo picado ou em cubos
- 1 filtro de café
- 1 suporte para o filtro
- material animal ou vegetal escolhido – Casca de Banana
- 2 béqueres de 250 mL
- 1 frasco contendo 20 mL de detergente em gel
- 1 colher de sopa de sal
- 1 ralador
- 1faca de cozinha pequena
- solução de lise
- 1 frasco contendo 100 mL de etanol gelado
- 1 bastão de vidro fino
- 1 proveta
- 1 gral e pistilo


PROCEDIMENTO

Preparo da solução de lise

1. Em um béquer de 250 mL colocar 20 mL de detergente em gel;
2. Adicionar uma colher de sopa de sal;
3. Adicionar 80 mL de água destilada quente. Homogeneizar.


Técnica

1.Aquecer 80 mL de água destilada no banho-maria, a 60-70oC;
2. Picar ou ralar o material animal ou vegetal escolhido;
3. Preparar a solução de lise;
4. Transferir o material ralado ou picado para o béquer contendo os 100 mL de solução de lise. Homogeneizar bem;
5. Depois de homogeneizado, aguardar 10 minutos;
6. Após 10 minutos, colocar o béquer contendo o homogeneizado em isopor com gelo eaguardar até esfriar a solução;
7. Após esfriar, filtrar a solução com o auxílio do filtro de café utilizando o béquer limpo;
8. No béquer contendo a solução filtrada, adicionar lentamente, pela parede do frasco, o mesmo volume de etanol gelado. O DNA é insolúvel em etanol, de modo que precipita na junção das duas fases. Nesse momento, será possível visualizar, na interfase entre a solução e oetanol, uma massa branca de material.


RESULTADO ESPERADO

Formação de uma massa branca insolúvel, o DNA.





RESULTADO OBTIDO


DISCUSSÃO
O passo essencial na análise genética de plantas, através de fragmentos de DNA, é o isolamento e a purificação de quantidades suficientes de DNA de boa qualidade (KIDWELL; OSBORN, 1992 apud MAZZA; BITTENCOURT, 2000, p.13). O DNA precisa estarintegro e livre de impurezas, para que sua amplificação seja possível (MILACH, 1998 apud MAZZA; BITTENCOURT, 2000, p.13).
A maceração é importante para que a parede celular seja quebrada e assim liberado o DNA. As membranas celulares são formadas por uma bicamada de fosfolipídios onde se integram algumas proteínas. Na extração do DNA, quando o detergente entra em contato com as membranas...
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