extração de dna

Páginas: 5 (1046 palavras) Publicado: 25 de novembro de 2013
UNIVERSIDADE NILTON LINS









RELATÓRIO DE NaOH EXTRAÇÃO DE
DNA ATRAVÉS DE SALIVA












MANAUS/AM
2013











RELATÓRIO DE NaOH EXTRAÇÃO DE
DNA ATRAVÉS DE SALIVA





“Trabalho apresentado como requisito de nota parcial da P2 da disciplina de Genética dos cursos de Ciências Biológicas e Medicina, orientado pelo Professor Luiz Eduardo”.MANAUS/AM
2013
Relatório de NaOH extração de DNA através de saliva

Na manha de sábado as 07h30min começamos nossa aula pratica em laboratório, neste dia estavam presentes 9 pessoas sendo que 6 delas fazem medicina e pagão matéria com a turma de biologia e nosso professor.
Primeiro passo:
Extração da saliva em capsulas identificada com o N: 26-27 para retirada doDNA, as 07h45min am usamos as pipetas de 10000 e capsulas 10000 . Em seguida adicionamos 1 ml de agua em temperatura ambiente e agitamos a cada 2 minutos, depois de 6minutos concluídos, levamos a amostra para a centrifugar por 1minuto em 12,000g; descartamos 950µL de agua da amostra e reiniciamos o processo 2 a 5.
Com tudo concluído e com a amostra centrifugada novamente, adicionamos600µL de NaOH 50mM; de pois levamos a amostra ao vortex por 5-10 segundos, com estes passo concluído, armazenamos a amostra em temperatura de 95ºC por 5 minutos numa estufa, enquanto isso, fomos fazer a forma em gel na qual recebera nossa amostra de DNA N: 26-27.
A base em gel e feita com umas das soluções chamada H12 e TAE como solvente, pois sua concentração e muito baixa e adicionamos 30µldo solvente e levamos ao micro ondas por 60 segundos até ficar totalmente transparente feito isso adicionamos o brometo de Etidro altamente toxico.
Com a mistura preparada colocamos sobre o molde para fazermos nossa forma em gel e usamos um dispositivo para fazer os furos no qual recebera nossa amostra.
Cada furo na forma em gel pertence a uma pessoa que esta identificada comnúmeros que vai de 20 a 32, em seguida iniciamos a introdução da amostra de DNA nos furos da base em gel as 10h45minutos, com o processo concluído sobre agua ionizada 50 vezes mais que uma agua comum, iniciamos o processo de eletro Florence que permitira que cada amostra seja diferenciada de cada uma. Para podermos ver a reação da amostra misturamos um corante, azul de glicerina.
Coletamosa amostra e introduzimos nos espaços da forma em gel, para vermos as combinações genéticas através do emissor de luz ultravioleta para o experimento final.
Em seguida fomos fazer as leituras de pureza das amostras num aparelho chamado espectro fotômetro, onde coletamos os resultados de todas as amostras coletadas, no qual foi feita uma tabela de identificação.


Concentração de DNAN: amostra
Ng/wl
260/280
25
0,7
1,55
26
89,3
1,63
27
5,1
1,51
28
2,8
1,75
29
4,1
1,05
30
2,5
1,62
31
1,7
2,73
32
3,3
1,26

Todo o procedimento foi feito e todas as amostras mostrarão impureza e baixo gral de PH, pois precisávamos de 400000 no resultado e obtemos apenas 200000 Como mostra a tabela.
No processo de verificação das amostras no aparelhoultravioleta, também não foi satisfatório, varias das amostras estavam danificadas por conta da falta de habilidades dos alunos no qual era suas primeiras aulas praticas em extração de DNA através de saliva humana.
A aula foi encerrada as 11h55 am.

REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE - PCR



A Reação em Cadeia da Polimerase  (que em inglês é Polimerase Chain Reaction – PCR) é definidacomo uma técnica de amplificação de ácido ribonucléico (DNA) sem utilizar organismos vivos.
Este processo foi descrito primeiramente por Kary Mullis, no ano de 1983, sendo que somente dez anos depois foi lhe concedido o Prêmio Nobel da Química pelo seu trabalho. No ano de 1989, a Hoffman La Roche & Perkin-Elmer Corporation patenteou esta técnica.
Atualmente, o PCR é utilizado em...
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