Estudante

MICROBIOLOGIA
COLORAÇÃO DE GRAM – FARMÁCIA – 2/2014
ROTEIRO DE AULA PRÁTICA
Objetivo
Fazer coloração de gram utilizando lâminas com esfregaços prontos e fixados de cocos gram positivos em cachos, cocos gram positivos em cadeias, bacilos gram positivos e bacilos gram negativos. Com o objetivo de classificar as bactérias em gram-negativas e gram-positivas.
Material
Bateria para coloração de gram: Cristal violeta, Lugol, Álcool absoluto e Fucsina.
Bico de bunsenEsfregaços prontos e fixados de cocos gram positivos em cachos, cocos gram positivos em cadeias, bacilos gram positivos e bacilos gram negativosLâminas
Microscópio
Óleo de imersão
Papel de filtro
Recipiente com hipoclorito de sódio para descarte
Suporte para lâminas
SwabsAlça de Platina em anel
Método
Preparação do esfregaço Em uma lâmina limpa pingar uma gota de água, com a alça de platina colocar a amostra na lâmina, espalhar a amostra na lâmina, esperar secar e passar três vezes na chama do bico de bunsen para que a amostra se fixe na lâmina.
Caso a amostra seja liquida, não é necessário pingar uma gota de água. Basta transferir a amostra para a lâmina, espalhar a amostra com a alça de platina, esperar secar e passar três vezes pela chama do bico de bunsen.
É aconselhável colocar um pedaçinho de fita crepe na lâmina do lado contrario que será realizado o esfregaço, para que na hora da coloração, saiba de que lado foi feito o esfregaço.
Coloração de GramColocar a lâmina no suporte com a amostra fixada para cima, cobrir a lâmina com cristal violeta por 1 minuto e desprezar. Cobrir com lugol por 1 minuto e desprezar. Passar a lâmina em um fio de água. Cobrir com álcool absoluto por 10 segundos, desprezar, lavar a lâmina com um fio de água corrente. Cobrir com fucsina por 30 segundos, desprezar, e novamente lavar a lâmina com um fio de água corrente. Secar em papel de filtro. Pingar uma gota de óleo de imersão e observar no microscópio.
ORIENTAÇÕES PARA O RELATÓRIO –
Orientações