Espectrofotometria

ESPECTROFOTOMETRIA

A espectrofotometria é uma técnica analítica que avalia a capacidade dos solutos absorverem luz em comprimentos de onda específicos. A medida da luz absorvida permite inferir sobre a concentração do soluto em determinada solução ou material biológico.
Este método físico é também conhecido como fotometria ou colorimetria, e é indicado para se determinar a concentração dos solutos normalmente corados como também dos incolores, mas passíveis de adquirir cor mediante o emprego ajustado de certos reativos. Compostos desconhecidos podem ser identificados por seus espectros característicos ao violeta, visível ou infravermelho. As concentrações de soluções de compostos conhecidos podem ser determinadas medindo-se a absorção em um ou mais comprimentos de onda. Reações enzimáticas podem ser frequentemente seguidas medindo-se espectrofotometricamente o aparecimento de um produto ou o desaparecimento do substrato.
O aparelho utilizado é o espectrofotômetro e os componentes principais são:
a) Fonte luminosa (energia radiante); b) dispositivo de focalização (ou colimador), o qual transmite um intenso feixe retilíneo de luz; c) um monocromador (prisma ou grade) utilizado na resolução da radiação emitida pela fonte luminosa em seus vários comprimentos de onda (); d) um dispositivo para selecionar o comprimento de onda desejado; e) um compartimento para a amostra contida em um tubo de ensaio ou cubeta; f) um detector com célula fotoelétrica; e g) um medidor elétrico (galvanômetro) para registrar a intensidade de energia captada pelo detector.
O monocromador permite selecionar o comprimento de onda ou faixa de comprimentos de onda que incide sobre a solução, usando-se um prisma ou um filtro ótico. O prisma apresenta maior poder de resolução, permitindo análises tanto na região do visível quanto no ultravioleta – caso do espectrofotômetro. O filtro ótico deixa passar faixas de comprimentos de onda e é de uso limitado à região visível – caso do