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Protocolo para extração e leitura de GSH

1 – Preparar tampão fosfato de sódio pH 7,0, 0,1M:

Fosfato mono – PM = 137,99 g – 1 M – 1000 mL
X g – 0,1 M = 13,799 g

13,799 g – 1000 mL
X – 100 mL
X = 1,38 g para 100 mL
Fosfato Di – PM = 268,07 g – 1 M – 1000 mL
X g – 0,1 M = 26,807 g

26,807 g – 1000 mL
X – 100 mL
X = 2,68 g para 100 mL

Pipetar o mono no di até obter pH 7.

2 - Preparar uma solução estoque de GSH 10 mM: pesar 0,0153 g e avolumar a 5 mL com tampão fosfato de sódio 0,1 M pH 7,0:

3 - Preparar os pontos da curva abaixo, avolumando em tampão fosfato de sódio 0,1 M pH 7,0:

|Sol. 10 mM GSH |Alíquotas da sol. 10 mM |Avolumar com TAMPÃO para: |
|Branco 0 μM |(Será apenas tampão + DTNB em tampão) |- |
|30 μM = 0,03 mM |15 μL |10 mL |
|60 μM = 0,06 mM |30 μL |5 mL |
|90 μM = 0,09 mM |45 μL |5 mL |
|120 μM = 0,12 mM |60 μL |5 mL |
|180 μM = 0,18 mM |90 μL |5 mL |
|240 μM = 0,24 mM |120 μL |5 mL |
|300 μM = 0,30 mM |150 μL |5 mL |
|500 μM = 0,50 mM |250 μL |5 mL |
|750 μM = 0,75 mM |375