Ensaio Imunoenzimatico - ELISA

Ensaio Imunoenzimatico - ELISA

Introdução
Os métodos imunológicos desenvolvidos para quantificar a concentração de antígenos e anticorpos, por apresentarem grande sensibilidade e especificidade, tornaram-se técnicas padronizadas para pesquisa e aplicações clínicas. Entre esses métodos, um dos mais usados é o ELISA, do inglês Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay (Ensaio de Imunoabsorção Ligado a Enzima).
O Elisa se baseia na identificação de anticorpos e ou antígenos, por anticorpos marcados com uma enzima, de maneira que esta enzima age sobre um substrato e a reação faz com que o cromógeno (microrganismo que produz coloração no meio onde se encontra) mude de cor. O produto da reação, além de colorido, é insolúvel para não difundir do local da formação (Vaz, 2007).
A enzima mais comumente utilizada nestas provas é a peroxidase, que catalisa a reação de desdobramento da água oxigenada (H2O2) em H2O maisO2.
Existem vários modelos de testes de ELISA; em sua forma mais simples,chamada ELISA indireto, um antígeno aderido a um suporte sólido (placa deELISA) é preparado; a seguir coloca-se sobre este os soros em teste ( ex. sorohumano), na busca de anticorpos contra o antígeno. Se houver anticorpos nosoro em teste ocorrerá a formação da ligação antígeno-anticorpo, queposteriormente é detectada pela adição de um segundo anticorpo dirigidocontra imunoglobulinas da espécie onde se busca detectar os anticorpos(humana, no caso), a qual é ligada à peroxidase. Este anticorpo anti-IgG, ligadoà enzima denomina-se conjugado. Ao adicionar-se o substrato apropriado para a enzima. Os orifícios onde ocorreu a reação antígeno-anticorpo apresentam uma coloração (variável dependendo do substrato).
Outro método é o chamado ELISA de bloqueio ou competição, em que a presença de anticorpos em determinado soro é revelada pela competição com um anticorpo específico (mono ou policlonal) dirigido contra o antígeno.