Dosagem de proteínas do leite pelo método do Biureto

Páginas: 11 (2621 palavras) Publicado: 10 de agosto de 2013


UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA – CAMPUS FLORESTAL
Curso de Licenciatura em Ciências Biológicas





Relatório de Aula Prática de Bioquímica:
Prática 10 – Dosagem de proteínas do leite pelo método do Biureto





Andrine C.Souza 639
Gustavo R. Rios 640
Gabriella F. Monteiro 643Kamilla I. C. Vieira 630




31 de Outubro de 2011
Florestal - MG
Introdução
Existem vários métodos para quantificação de proteínas, e sua escolha depende de alguns fatores como: natureza da proteína, presença de interferentes, rapidez, sensibilidade, eficiência, custos da operação, etc.
Espectrofotometria
Essa técnica segue o princípio de absorção da luz pela substância a serquantificada. A absorção das radiações ultravioletas, visíveis e infravermelhas dependem das estruturas das moléculas, e é característica para cada substância química. Quando a luz atravessa uma substância, parte da energia é absorvida (absorbância): a energia radiante não pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das substâncias se deve a absorção (transmitância) de certos comprimentosde ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas não absorvidos.
Lei de Lambert-Beer
A transmitância da solução de substancia que absorve a luz depende da natureza da substância, de sua concenttração e da espessura da solução atravessada pela luz. Assim : T= 10 –kcl, onde T é a transmitância, K é uma constante coeficiente deextinção molar, c é a concentração da substância e I a espessura da solução atravessada pela luz.
A absorvância de uma solução em um determinado comprimentode onda, é diretamente proporcional á concentração da substância.
Log T= -kcl
Equipamentos Espectrofotométricos
Para a determinação da absorvância ou transmitância de uma solução, são utilizados colorímetros ou espectrofotômetros. Oscolorímetros são utilizados para quantificar substâncias que absorvem energia radiante do espectro visível. Esses aparelhos possuem uma fonte luminosa emissora de luz branca que atravessa um filtro, o qual deixa passar apenas a faixa de comprimento de energia radiante desejada. Nos espectrofotômetros, a luz transmitida pela solução incide na célula fotoelétrica que traduz a energia luminosa por um sinalelétrico detectado pelo galvanômetro, que é graduado em duas escalas: uma de transmitância e outra de absorvância.
Determinação Espectrofotométrica da Concentração de uma Solução
Primeiro é necessário calibrar o fotocolorímetro ou o espectrofotômetro. Para isso é construida uma curva padrão, que segue algumas etapas:
1) Preparar soluções padrão da substancia a ser avaliada;
2) Prepara umasolução contendo apenas solventes(branco);
3) Selecionar o comprimento de onda adequado;
4) Ajustar o zero de absorvância do aparelho usando o branco. Projetar os resultados graficamente, assim achará a curva padrão que permitirá obter a concentração de uma amostra, desde que se conheça a absorvância.
Determinação Espectrofotométrica de Proteínas pelo Método do Biureto
Um dos métodos utilizadospara dosagem de proteína é chamado de método do Biureto. Esse método faz uso da propriedade de íons Cu2+ em meio alcalino de formar ligações com o nitrogênio das ligações peptídicas, que reage de modo quantitativo com as proteínas. Desta reação (reação de biureto) resulta uma coloração púrpura intensa, que absorve fortemente a radiação a 540 nm. Este fato pode ser explorado para se determinar porcolorimetria a quantidade de proteína de uma solução. A cor desenvolvida numa reação de íons de Cu2+ em meio alcalino com estas proteínas deve-se exclusivamente às ligações peptídicas e a sua intensidade é proporcional a quantidade de tais ligações. A absorbância é detectada no espectrofotômetro ou fotocolorímeto.
Objetivo geral
Ao final da prática o aluno deverá ser capaz de aplicar o...
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