Dna da cebola

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE CENTRO DE CIÊNCIAS EXATAS E DA TECNOLOGIA DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

QUÍMICA DE BIOMOLÉCULAS (106406-T1)

- EXTRAÇÃO DO DNA DA CEBOLA-

ATIVIDADE EXPERIMENTAL – Nº.: 06 REALIZADA NO DIA (11/11)

Profº Drº. André Luís Bacelar Silva Barreiros

Christean Santos Oliveira Ivanna Gisele Rosenda Luís Fabrício Santana

São Cristóvão – 25 de novembro de 2011

1.0 Objetivos
 Geral Extrair o DNA das células da cebola, por meio da quebra mecânica destas, utilizando detergente para remover os lipídios de membrana e álcool para precipitar o DNA.  Específico  Utilizar uma solução de lise, constituída por detergente e EDTA, com a finalidade de remover os lipídios e seqüestrar os metais Mg 2+ e Ca2+;  Prevenir a degradação do DNA extraído pela adição de EDTA;  Desnaturar o DNA pelo aumento da temperatura, diminuindo sua viscosidade;  Renaturar o DNA pelo abaixamento da temperatura, aumentando a viscosidade;  Confirmar a extração de DNA por meio do reagente de Dische.

2.0 Procedimento Experimental

Béquer  50 g de cebola descascada e ralada  100 mL de solução de lise Misturar bem

Repousar por 20 minutos à temperatura ambiente

Filtrar à suspensão em funil com gase

Sólido

Líquido

Descartar

Recolher em uma proveta

Anotar volume

Tubo 1  4 mL do filtrado  8 mL de etanol 95% gelado Não misturar

Observar formação de precipitado branco

Enrolar o DNA com bastão de vidro

Transferir para outro tubo de ensaio

Tubo 2  DNA  0,5 mL de água destilada  1,5 mL de Reagente de Dische Aquecer em banhomaria / 10 min

Tubo 3  0,5 mL de água  1,5 mL do reativo de Dische Aquecer em banhomaria / 10 min

3.0 Materiais e Reagentes
Vidrarias 02 Provetas de 100 mL 03 Béqueres de 250 mL 01 funil de vidro 03 pipetas de 5 mL 02 tubos de ensaio 01 bastão de vidro 01 pipeta graduada 1,0 mL Reagentes 50,0g de cebola ralada 100 mL de solução de lise (0,1% de detergente em solução 25 mmol/L de EDTA) 58,0 mL de