Diagnostico molecular

09/10/2012

Diagnóstico molecular e a prática mé

Diagnóstico molecular
Uso das técnicas de biologia molecular para fazer ou confirmar o diagnóstico doença genética, presença de microrganismos, ....

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Principais técnicas usadas para diagnóstico molecular
PCR e suas variações
RT PCR PCR em tempo real
Genotipagem Expressão

Sequenciamento RFLP Southern blot (mais antigo)

Aplicações da PCR - diagnóstico de Doença de Huntington
Características clínicas doença neurodegenerativa progressiva com alterações motoras, cognitivas e psiquiátricas primeiras manifestações: coordenação, planejamento mental, humor deprimido ou irritado problemas motores marcantes no último estágio, total dependência no final da vida início entre 35- 44 anos (50 anos) sobrevida em torno de 15-18 anos (média de idade no óbito: 54-55 anos) prevalência 3-7/100.000 entre descendentes de europeus

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Aplicações da PCR - diagnóstico de Doença de Huntington
Diagnóstico
Suspeita clínica História familiar positiva Análise molecular (98,8% de sensibilidade)

Padrão de herança
Autossômico dominante, com antecipação

Aplicações da PCR - diagnóstico de Doença de Huntington
Aspectos moleculares

Símbolo gênico

Locus

Proteína

HD

4p16.3

Huntingtina

* HD é um gene de ~ 200kb, 67 exons e produz dois transcritos: um de 10,3 kb e outro de 13,6 kb. O gene possui uma repetição do trinucletídeo CAG no exon 1, codon que codifica glutamina. A proteína huntingtina tem 3144 aa, e sua função não está ainda bem esclarecida.

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Aplicações da PCR - diagnóstico de Doença de Huntington
Aspectos moleculares
Origem: expansão de trinucleotídeos CAG no 1º exon, em pelo menos um cromossomo, em 100% dos pacientes.

O resíduo de poliGLN expandido parece ser importante em interações proteína-proteína, que podem contribuir para a formação de complexos insolúveis e/ou tóxicos: apoptose.

Aplicações da PCR - diagnóstico de Doença de