Determinação de Proteinas

Páginas: 8 (1945 palavras) Publicado: 3 de dezembro de 2013
METODOS PARA DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS
O procedimento mais comum para determinação de proteína é através da determinação de um elemento ou um grupo pertencente à proteína. A conversão para conteúdo de proteína é feito através de um fator. Os elementos analisados geralmente são carbono ou nitrogênio, e os grupos são aminoácidos e ligações peptídicas.
Existem diversos métodos para fazer adeterminação de proteínas em diversos tipos de amostras, as técnicas podem ser utilizadas apartir de espectrofotômetros, com destiladores de nitrogênios e também com analisadores elementares de proteínas. A sensibilidade de detecção de proteínas muda de acordo com cada metodologia e o custo do processo também, vai da necessidade de cada pesquisar procurar a metodologia correta para ser usada. Abaixosegue alguns métodos para determinação de proteínas em espectrofotômetros, destiladores de nitrogênio e analisadores elementares de proteínas.

MÉTODO DE KJELDAHL
Os métodos de Kjeldahl e Dumas são mais empregados para amostras sólidas e são baseados na análise da concentração de nitrogênio, sendo este convertido para proteína por um fator de conversão adequado. O método de Kjeldahl é o métodooficial para determinação da concentração proteica a partir da concentração de nitrogênio total sendo, geralmente, o mais utilizado para este propósito 
Este método determina nitrogênio orgânico total, isto é, o nitrogênio proteico e não proteico orgânico. Porém, na maioria dos alimentos, o nitrogênio não proteico representa muito pouco no total. A razão entre o nitrogênio medido e a proteínaestimada depende do tipo de amostra e de outros fatores. Por exemplo, no trigo esta razão é afetada pelas condições de crescimento e quantidade e tipo de fertilizante utilizado. Para converter o nitrogênio medido para proteína, deve-se multiplicar o conteúdo de nitrogênio por um fator arbitrário, que representa um fator médio para o material em estudo, que é 5,7 para o trigo, e 6,25 para alimentos emgeral 
- VANTAGENS E DESVANTAGENS
O procedimento do método baseia-se  no aquecimento da amostra com ácido sulfúrico para digestão até que o carbono e hidrogênio sejam oxidados. O nitrogênio da proteína é reduzido e transformado em sulfato de amônia. Adiciona-se NaOH concentrado e aquece-se para a liberação da amônia dentro de um volume conhecido de uma solução de ácido bórico, formando borato deamônia. O borato de amônia formado é dosado com uma solução ácida (HCL) padronizada. Existe uma segunda maneira de recolher a amônia, em uma solução ácida (H2SO4 padrão) em excesso, e depois titular o ácido que não reagiu com a amônia, com uma solução básica padronizada (NaOH). Esta segunda maneira tem a desvantagem de necessitar de duas soluções padronizadas e também de fazer a determinaçãoindiretamente.
METODO DE DUMAS
O método descoberto por Dumas (1831) determina N total, após combustão da amostra a 700-800ºC, por medida volumétrica do N gasoso. A medida é difícil e sujeita a erros, porque a quantidade de amostra é muito pequena e às vezes não representativa de todo alimento. Existe um equipamento recentemente construído (1960) que completa a análise em 10 minutos e com boaprecisão.

MÉTODO DE BIURETO
O método se baseia na reação do reativo do biureto, que é constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre em solução. O cobre, em meio alcalino, reage com proteínas formando um complexo quadrado planar com a ligação peptídica. O produto de reação apresenta duas bandas de absorção, uma em 270 nm e outra em 540 nm. Apesar dabanda na região de 270 nm aumentar em seis vezes a sensibilidade do método do biureto, a banda na região de 540 nm é a mais utilizada para fins analíticos, porque diversas substâncias, normalmente presentes na maioria dos meios analisados, absorvem na região de 270 nm causando muita interferência no método.

O método de biureto tem sido aplicado para determinar a concentração de proteínas...
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