Determinação de proteína

Páginas: 5 (1096 palavras) Publicado: 11 de março de 2014










RELATÓRIO PRÁTICA 5
DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNA
(14 de setembro de 2011)




DISCIPLINA: BIOQUÍMICA DOS ALIMENTOS






1. INTRODUÇÃO

As proteínas desempenham papéis extremamente importantes, na maioria dos processos biológicos, atuando como enzimas, hormônios, neurotransmissores, transportadoresatravés das membranas celulares e outros.
O desenvolvimento de metodologias para a determinação de proteínas totais sempre foram de grande interesse para profissionais, tanto ligados à indústria de alimentos, laboratórios de análises clínicas, como para pesquisadores de diversas áreas.
O método de biureto tem sido aplicado para determinar a concentração de proteínas totais em diversos meios, sendoeles: soro ou plasma sangüíneo, líquido cérebro espinhal (líquor), urina, alimentos, saliva, fibrinogênio e tecido animal. O método de biureto tem sido, também, utilizado em análise por injeção em fluxo, assim como em alguns métodos cinéticos. Apesar de ser rápido, utilizar reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas.
O método sebaseia na reação do reativo do biureto, que é constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre em solução, sendo o tartarato de sódio o recomendado. O cobre, em meio alcalino, reage com proteínas formando um complexo quadrado planar com a ligação peptídica.
O método de Bradford é uma técnica para a determinação de proteínas totais que utiliza ocorante de “Coomassie brilliant blue” BG-250. Este método é baseado na interação entre o corante BG-250 e macromoléculas de proteínas que contém aminoácidos de cadeias laterais básicas ou aromáticas. No pH de reação, a interação entre a proteína de alto peso molecular e o corante BG-250 provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para a forma aniônica, que absorve fortemente em 595 nm76.2. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Determinação se proteína pelo método de Bradford

- Numere os tubos de ensaio de 1 a 5;
- No tubo 1 adicione 1 mL de soluções de cloreto de sódio 0,15 mL (salina);
- No tubo 2 adicione 1 mL de albumina;
Albumina = solução de 5% de clara de ovo em salina (cloreto de sódio 0,15M);
- No tubo 3 adicione 1 mL de extrato de carne;
Extrato de carne: coloqueem grau pequena quantidade de carne, adicione 10 mL de salina e macere por 15 minutos, com auxilio de um pistilo. Filtre em gaze e lave o resíduo de carne com mais 5 mL de salina. Filtre novamente. Retire sua alíquota.
- No tubo 4 adicione 1 mL de leite;
- No tubo 5 adicione 1 mL de extrato de soja;
Extrato de soja: coloque em um grau pequena quantidade de farinha de soja, adicione 10 mL desalina e macere, por 15 minutos, com auxilio de um pistilo. Filtre em gazes e lave o resíduo do extrato com mais 5 mL de salina. Filtre novamente. Retire sua alíquota.
- Adicione, com auxilio de uma pipeta 1 mL de reagente de Bradford, em todos os tubos que contém amostra. Observe e anote seus resultados.

Determinação se proteína pelo método de Biureto

- Numere os tubos de ensaio de 1 a 5;- No tubo 1 adicione 1 mL de soluções de cloreto de sódio 0,15 mL (salina);
- No tubo 2 adicione 1 mL de albumina;
Albumina = solução de 5% de clara de ovo em salina (cloreto de sódio 0,15M);
- No tubo 3 adicione 1 mL de extrato de carne;
Extrato de carne: coloque em grau pequena quantidade de carne, adicione 10 mL de salina e macere por 15 minutos, com auxilio de um pistilo. Filtre em gazee lave o resíduo de carne com mais 5 mL de salina. Filtre novamente. Retire sua alíquota.
- No tubo 4 adicione 1 mL de leite;
- No tubo 5 adicione 1 mL de extrato de aveia;
Extrato de aveia: coloque em um grau pequena quantidade de aveia, adicione 10 mL de salina e macere, por 15 minutos, com auxilio de um pistilo. Filtre em gazes e lave o resíduo do extrato com mais 5 mL de salina. Filtre...
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