Desenvolvimento de metodologia alternativa para o monitoramento de biossíntese de novos derivados de antiretrovirais

Páginas: 10 (2448 palavras) Publicado: 29 de abril de 2013
1 INTRODUÇÃO

1.1 Bioconversão

Reações de biotransformação/ bioconversão/ biossíntese referem-se às reações em substâncias estranhas ou xenobióticos, realizadas por enzimas. Podem empregar enzimas isoladas ou microrganismos (bactérias, fungos e leveduras) (BASTOS, 2005)
A utilização de enzimas à catálise química é vantajosa, principalmente com relação à velocidade das reações catalizadas,às condições de realização dos ensaios, à versatilidade que apresentam como reagentes e a seletividade para reações catalisadas por elas (AZERAD, 1995). Devido aos aspectos seletivos das reações enzimáticas tais como:
- Quimiosseletividade: algumas enzimas têm a capacidade de reagir com um único grupo funcional, mesmo na presença de outros grupos químicos reativos.
- Regiosseletividade: asenzimas podem discriminar entre grupos funcionais idênticos localizados em posições estruturalmente diferentes da molécula do substrato.
- Enantiosseletividade: quase todas enzimas são catalizadores quirais. Dessa forma, discriminam entre substratos enantioméricos ou grupos enantiotópicos de um substrato pró-quiral).
Alguns biocatalizadores podem realizar reações difíceis de se obter por métodostradicionais em química orgânica, tornando-os recomendáveis na síntese de compostos enatiomericamente puros. (BASTOS, 2005; PAZINI, 2006)
O uso de microrganismos como modelo para estudo do metabolismo de fármacos tem sido bem estabelecido desde o conceito primeiramente introduzido por Smith e Rosazza em 1974. O conceito de modelo microbiano segundo estes autores está fundamentado no fato de quetanto os fungos como os mamíferos são organismos eucariotos que apresentam sistema enzimático similar para a maioria das funções fisiológicas e para o metabolismo de xenobióticos (ABOURASHED et al., 1999).
Os sistemas microbianos são vantajosos devido a fácil preparação e o baixo custo dos meios de cultura; apresentam-se como um método reprodutivo já que os processos envolvidos são de simplesrepetição e a quantidade dos produtos formados é maior em relação aos modelos animais o que favorece a detecção, identificação e elucidação estrutural; a manutenção das culturas estoques de microrganismos é relativamente simples e barata em relação à manutenção de culturas de células e tecidos ou mesmo animais de laboratório; probabilidade de ocorrer transformações regio e estereosseletivas usandodiferentes cepas selecionadas pelo screening; possibilidade da descoberta de novos metabólitos com maior atividade e menr toxicidade em relação ao composto original. (ABOURASHED et al., 1999; AZERAD, 1999).
O uso de fungos filamentosos tais como Beauveria bassiana ATCC 7159, Cunninghamella echinulata ATCC 9244 e Mortierella isabelina NRRL 1757 na realização de reações de oxidação, redução eglicosilação, entre outras, tem se mostrado útil na bioconversão de uma grande variedade de compostos orgânicos. (CIRILO et al , 2005)

1.2 Técnicas cromatográficas de monitoramento e separação dos metabólitos

Para o monitoramento das reações de biotransformação é necessário o uso de métodos de análise físico-químicos. A cromatografia é um método de escolha devido a sua facilidade emefetuar a separação, identificação e quantificação das espécies químicas. A cromatografia acontece pela passagem de uma mistura através de duas fases: uma estacionária (fixa) e outra móvel. A grande variabilidade de combinações entre a fase móvel e estacionária faz com que a cormatografia tenha uma série de técnicas diferenciadas como por exemplo:
- Cromatografia em camada delgada (CCD) ou TLC, doinglês thin-layer chromatography. Consiste na separação dos componentes de uma mistura através da migração diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uam superfície plana. Utiliza-se uma placa de vidro ou metal como suporte e geralmente sílica gel, alumina, terra diatomácea ou celulose como fase estacionária. A CCD é um método simples,rápido, visual e econômico. Para a...
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