Cromatografia Liquida de Gel de Filtra o

Cromatografia Líquida de Gel de Filtração
Objetivo:
Realizar separação por exclusão de dois corantes ( vermelho de fenol e azul de Dextran) pelo método de cromatografia de gel filtração.
Materiais Utilizados:
* Coluna de eluição. Fase estacionária: Sephadex
* Bécher
* Espectrofotômetro: Femto 800XI
* Cubetas
* Pipeta graduada
* Suporte universal
Amostras:
* Vermelho de fenol (solução em estoque no laboratório). Coloração vermelha intensa.
* Azul de Dextran (solução em estoque no laboratório). Coloração azul escuro
Procedimento:
Ao chegarmos na bancada, o aparato para realização da cromatografia líquida de gel filtração já estava previamente montado. Este era composto por uma coluna de vidro presa a um suporte universal e preenchida com resina SEPHADEX (fase estacionária) e uma a quantidade de PBS (fase móvel) suficiente para que a resina não seque. A aplicação das amostras foi feita com bastante cuidado e o mais perto possível da resina, porém de forma a não tocá-la. Aplicaram-se duas gotas do corante vermelho de fenol e duas gotas de azul de Dextran. Terminada a aplicação, abriu-se a torneira da bureta e a fase móvel começou a ser injetada lentamente para não diluir a amostra. Ao observar que a solução de corantes já estava sendo eluída aumentou-se o fluxo de injeção de tampão, que foi feita utilizando uma pipeta graduada de 1 mL com a vazão controlada manualmente.
Todo o conteúdo que saiu da coluna foi coletado diretamente em cubetas de 1mL e levados ao espectrofotômetro para serem feitas as leituras. Foram recolhidas um total de 18 alíquotas.

Resultados e Discussões :

Tabela 1: Valores da absorbância dos comprimentos de onda de 560nm e 620nm em relação ao volume.

Gráfico 1: Absorbâncias das amostras nos comprimentos de onda de 560nm e 620nm x Volume (mL)
Considerações do gráfico:
Através do gráfico representado acima pode ser observado a relação das frações de 1 mL(volume não acumulados: 1° mL, 2° mL,...) que foram recolhidos durante a corrida.
Teoricamente