Cromatografia em coluna, GC e HPLC

Páginas: 8 (1758 palavras) Publicado: 20 de outubro de 2014
Introdução

Entre os métodos modernos de análise, a cromatografia ocupa um lugar de destaque devido à facilidade com que é efetua a separação, identificação e quantificação das espécies químicas. A cromatografia pode-se definir como um método de análise físico-químico de separação dos componentes de uma determinada mistura, realizada através da distribuição desses componentes em duas fases emcontato direto: Uma fase estacionária (FE), e outra que se move através dela (FM). Durante a passagem da fase móvel sobre a estacionária, componentes da mistura são distribuídas por ambas as fases tal forma que um deles fica retido seletivamente pela fase estacionária.
Uma das diversas modalidades de cromatografia baseia-se na diferente distribuição das substancias da amostra entre uma FE sólidaou líquida, e uma FM gasosa. A essa modalidade deu-se o nome de Cromatografia Gasosa (GC), pela sua característica principal de utilizar um gás de arraste como fase móvel do sistema. Nesse processo a amostra, por meio de um sistema de injeção, é introduzida em uma coluna contendo a FE. O uso de temperaturas convenientes no local da injeção da amostra e na coluna possibilita a vaporização dessassubstancias que, são retiradas por tempos determinados e chegam à saída da coluna em tempos diferentes, que por fim são detectadas pelo sensor previamente escolhido. A GC é atualmente uma das técnicas de análise de maior uso, muito bem consolidada e tendo como principais vantagens grande capacidade detectiva, Excelente capacidade analítica, tempo de análise com máximo de poucas horas, e relativafacilidade de manuseio de equipamento. Como principal limitação a GC possui requisitos específicos para amostra, sendo ela basicamente um derivado volátil e termicamente estável.
Outra técnica cromatográfica muito utilizada para separações que não exige da amostra estabilidade térmica elevada, ou a necessidade do composto ser facilmente volátil é a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC),que consegue separar misturas que contêm um grande número de compostos similares. Essa técnica consiste em empregar colunas recheadas com materiais especialmente preparados e uma FM líquida eluída sob altas pressões. A principal característica é a presença de uma bomba que gera a pressão necessária para que a FM passe na FE com uma vazão suficientemente rápida, sem prejudicar a interação do analitocom as fases. Sua grande versatilidade possibilita ser aplicada para compostos orgânicos e inorgânicos sólidos ou líquidos, iônicos ou covalentes ou de baixa ou alta massa molar. Boa detectabilidade com medidas de até 10-9 g e alta resolução, fazer da HPLC um equipamento muito importante em laboratórios de análises. Como limitações, vale destacar o alto custo da instrumentação, alto custo deoperação e ausência de um bom detector universal.





Cromatografia em coluna: Separação dos pigmentos do espinafre

O espinafre possui coloração composta principalmente pelos pigmentos clorofilas, carotenos e xantofila. Neste trabalho foi realizada a separação destes pigmentos via cromatografia em coluna.
A eluição e consequente separação dos analitos são possíveis pela ação da gravidade epela diferença de polaridade entre os componentes analisados, a fase móvel (FM) e a fase estacionária (FE).
A fase móvel utilizada foi a mistura de hexano, éter de petróleo e acetona na proporção de 50:25:25 (v:v:v), sendo portanto relativamente apolar. Já a fase estacionária foi sílica gel (SiOH)
60 (0,063-0,2 mm), sendo assim polar. Dessa forma, os analitos mais apolares irão eluirprimeiro, uma vez que irão solubilizar melhor na FM. Já os analitos polares, terão um tempo maior de eluição, já que terão maior interação com a FE.








A ordem de polaridade dos pigmentos foi estabelecida mediante análise de suas estruturas moleculares. Os carotenos são hidrocarbonetos, sendo assim apolares. A clorofila é polar, entretanto menos polar que a xantofila, pois possui um átomo...
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